Распоряжение Коллегии ЕЭК № 84 от 20.06.2023 О проекте решения Совета Евразийской экономической комиссии «О внесении изменений в Правила проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза»

10.5. Производство вакцины

Сведения, касающиеся производства вакцины, необходимо представить в разделах 3.2.S.2 и 3.2.P.3 модуля 3 регистрационного досье.

Все этапы производства вакцины должны осуществляться с соблюдением требований Правил производственной практики. Обязательным требованием является соблюдение асептических условий производства, исключающих возможность контаминации промежуточных продуктов и полуфабрикатов посторонними инфекционными агентами.

При проведении испытаний на посторонние агенты развивающихся куриных эмбрионов, используемых в производственном цикле, параллельно инкубируют контрольные развивающиеся куриные эмбрионы без инокулята и проверяют их на отсутствие посторонних агентов.

В качестве альтернативы допускается проверять отдельные сборы на посторонние агенты на подходящих клеточных субстратах в присутствии антител, нейтрализующих гемагглютинин вируса гриппа.

Куриные эмбрионы, используемые в качестве субстрата для производства вакцины

Развивающиеся куриные эмбрионы, используемые в качестве субстрата для получения вакцины, должны быть взяты из поголовья птиц, строго контролируемых на соответствие категории SPF или должны быть получены из птицехозяйств, благополучных по возбудителям, патогенным для человека (качество поставляемых эмбрионов должно быть подтверждено ветеринарными свидетельствами). В приготовлении живой аттенуированной вакцины для профилактики гриппа должно быть использовано поголовье прошедшее отбор указанным способом.

Вирусный сбор

Использование тиомерсала в живой аттенуированной вакцине для профилактики гриппа, как и для любой живой вирусной вакцины, недопускается. В последующих производственных циклах должен использоваться вирусный сбор, в отношении которого подтверждены:

антигенная специфичность (то есть, определена принадлежность его HA вирусу «дикого» типа (штамму донору HA и NA));

отсутствие нейровирулентности.

Тесты на стерильность и отсутствие микоплазм, в случае согласования с уполномоченным органом референтного государства, проводятся на следующем этапе производственного процесса. В спецификацию на данном этапе должна быть включена оценка инфекционной активности, то есть определение эмбриональной инфекционной дозы, выражающейся в ЭИД50 в 1 мл вируссодержащей аллантоисной жидкости или оценка меры инфекционной активности количественным способом в специальных единицах формирования фокуса на миллилитр (FFU/мл) (выполненная методом флуоресцирующих антител).

Моновалентный нерасфасованный продукт

Испытания для моновалентного нерасфасованного продукта включают в себя испытания на сохранение генетических маркеров и подтверждение фенотипа живого аттенуированного вируса. Характеристика фенотипических свойств включает изучение маркеров аттенуации (например, маркер холодоадаптированности (или холодоадаптированный (cа) фенотип) или маркер температурочувствительности (температурочувствительный (ts) фенотип)) в исследованиях in vivo и (или) in vitro, позволяющих оценить возможность реверсии специфических аттенуирующих мутаций в дикий тип или реассортации донора аттенуации с диким вирусом.

Необходимо провести испытания подлинности гемагглютинина и нейраминидазы.

Тривалентный нерасфасованный продукти готовая вакцина

Тривалентный нерасфасованный продукт в соответствии со спецификацией должен быть изучен на специфическую активность.

Такие показатели качества, как специфическая активность, содержание овальбумина и бактериальных эндотоксинов должны входить в спецификацию на готовую вакцину (раздел 3.2.P.5.1 модуля 3 регистрационного досье).

Термостабильность готовой вакцины необходимо подтверждать соответствующим образом как в режиме реального времени, так и в условиях повышенной температуры. Необходимо определить и должным образом обосновать показатели спецификации в конце срока годности (срока хранения).

10.6. Валидация производственного процесса

Необходимо представить данные по валидации производственного процесса с целью подтверждения того, что критические стадии производства при установленных параметрах, способны эффективно и воспроизводимо обеспечить получение готовой вакцины, отвечающей требованиям, изложенным в спецификации.

Описание, документацию и результаты исследований по валидации производственного процесса, критических точек производства или методов количественного определения, используемых в производственном процессе, необходимо представить в разделах 3.2.S.2.5 и 3.2.P.3.5 модуля 3 регистрационного досье.

10.7. Описание характеристик вакцины

Определение характеристик вакцины необходимо для установления соответствующих спецификаций и обеспечения научно обоснованной оценки сопоставимости после внесения изменений в вакцину или процесс ее производства.

Биологические, иммунологические и физико-химические свойства антигена HA должны быть изучены с использованием широкого спектра современных аналитических методов. Например, должна быть оценена агрегация частиц, фенотип (генотип), морфология вируса, специфическая активность. Необходимо провести испытание подлинности и количественного определения технологических примесей (например, овальбумина (остаточного белка клеток-продуцентов)) и появившихся на более поздних этапах процесса производства примесей. Полученные данные необходимо использовать для уточнения показателей и норм спецификации для выпуска готовой вакцины.

10.8. Форма выпуска

В случае необходимости разработки определенной формы выпуска для особой целевой популяции разработка такой формы выпуска должна быть обоснована и подтверждена соответствующими данными о качестве, которые включают в себя информацию о совместимости, валидации производственного процесса и стабильности.

10.9. Стандартизация вакцины

Спецификация на готовую вакцину должна содержать данные о специфической активности (ЭИД50 или ЦПД50 (цитопатогенное действие)). Специфическую активность определяют для каждого серотипа, входящего в состав вакцины, с использованием референс-реагентов (для моновалентного нерасфасованного продукта – раздел 3.2.S.4.1, для готового продукта (вакцины) – раздел 3.2.P.5.1 модуля 3 регистрационного досье).

10.10. Изучение стабильностии срок годности (срок хранения)

Должны быть представлены результаты испытания стабильности естественного, ускоренного хранения и (или) стресс-исследования, для моновалентных нерасфасованных продуктов (разделы 3.2.S.7.1 – 3.2.S.7.3 модуля 3 регистрационного досье) и готовой вакцины (разделы 3.2.P.8.1 – 3.2.P.8.3 модуля 3 регистрационного досье). Должен быть разработан протокол оценки стабильности вакцины. Сроки и условия хранения должны быть обоснованы. Любое продление срока годности (срока хранения) должно основываться на данных исследования стабильности в режиме реального времени.

11.Требования к качеству при подаче заявленияоб изменении штаммового состава живых аттенуированныхвакцин для профилактики сезонного гриппа

11.1. Вирусы гриппа «дикого» типа как доноры HA и NАи разработка реассортантного вакцинного штамма

История производства посевного материала, должна включать в себя следующие документы и данные:

описание процедуры получения посевного материала (начиная с главного донора-аттенуации и штамма рекомендованного ВОЗ);

историю пассажа;

генетическую последовательность посевного материала;

описание фенотипических характеристик, включающее в себя результаты изучения маркеров аттенуации (в исследованиях in vivo), ключевых фенотипических маркеров: холодоадаптированный (cа) фенотип или температурочувствительный (ts) фенотип (в исследованиях in vitro, позволяющих оценить возможность реверсии специфических аттенуирующих мутаций в «дикий» тип или реассортации донора аттенуации с «диким» вирусом);

генетическую стабильность посевного материала, включая актуальные генотипические и фенотипические маркеры (секвенирование полного генома);

антигенное подобие штамма-донора дикого типа и главного посевного материала штамму, рекомендованному ВОЗ (проводится с помощью перекрестной реакции торможения гемагглютинации), которое документально подтверждено сотрудничающим центром ВОЗ;

протоколы аналитических испытаний (включая испытания на отсутствие посторонних агентов). В случае если посевной вирус проверяется на посторонние агенты методом ПЦР и при обсуждении вопроса с уполномоченным органом (экспертной организацией) референтного государства была согласована необходимость проведения дополнительных ПЦР-испытаний посевного материала, эти данные необходимо включить в регистрационное досье вакцин для профилактики гриппа;

испытания нейровирулентности. При ежегодном изменении (обновлении) штаммового состава (то есть для антигенно дрейфовых вариантов вируса гриппа) испытания нейровирулентности допускается не проводить. Такое испытание проводится в случае, если в вакцину включается новый подтип гемагглютинина вируса гриппа А (то есть не подтипа H1 или H3) или новый вирус гриппа В, отличающийся генетически от циркулирующих на данный момент линий, или в случае возникновения особых опасений о безопасности.

11.2. Разработка производственного процесса

Любые изменения, связанные с оптимизацией производственных процессов, обусловленные специфическими характеристиками штамма необходимо обосновать, соответствующие сведения необходимо включить в раздел 3.2.S.2 модуля 3 регистрационного досье.

Необходимо представить в разделе 3.2.P.3.2 модуля 3 регистрационного досье подробный состав на серию (производственную рецептуру) в связи с изменением (обновлением) штаммового состава и описание вакцины и ее состав в разделе 3.2.P.1 модуля 3 регистрационного досье.

Если уполномоченным органом (экспертной организацией) государства-члена было вынесено заключение о необходимости проведения клинического исследования в связи с изменением штаммового состава, то необходимо представить сертификат соответствия серий, используемых в клинических исследованиях. Сертификат соответствия серий представляется в комплекте документов по качеству либо в комплекте документов по клиническим исследованиям. Соответствующие сведения необходимо включить в раздел 3.2.P.2.2.1 модуля 3 регистрационного досье.

11.3. Валидация производственного процессаи (или) его оценка

При изменении (обновлении) штаммового состава сезонных вакцин для профилактики гриппа необходимо представить результаты исследований по валидации для критических точек производства в разделе 3.2.S.2.5 модуля 3 регистрационного досье.

Результаты анализа серии первых 3 моновалентных нефасованных продуктов, полученных из каждого нового посевного материала, должны быть представлены в разделе 3.2.S.4.4 модуля 3 регистрационного досье.

Должны быть представлены результаты анализа серии вакцины, включая оценку термостабильности.

11.4. Стандартизация вакцины

Необходимо представить результаты валидации аналитических методик, на изменение которых может повлиять замена одного или нескольких штаммов (например, валидация метода определения специфической активности). Данные о валидации необходимо представить в разделе 3.2.S.4.3 для моновалентных нефасованных продуктов, а также трехвалентных нерасфасованных продуктов или вакцины в разделе 3.2.P.5.3 модуля 3 регистрационного досье.

Необходимо представить в форме таблиц копии утвержденных спецификаций для моновалентных нефасованных продуктов в разделе 3.2.S.4.1 модуля 3 регистрационного досье и для вакцины в разделе 3.2.P.5.1 модуля 3 регистрационного досье, а также обзор аналитических методик в разделе 3.2.S.4.2 модуля 3 регистрационного досье.

11.5. Изучение стабильностии срок годности (срок хранения)

Необходимо представить результаты испытаний стабильности моновалентных нерасфасованных продуктов если предполагается их использование более 1 года. Соответствующие сведения включают в раздел 3.2.S.7 модуля 3 регистрационного досье.

Для лекарственного препарата (готовой вакцины), необходимо представлять в разделе 3.2.P.8 модуля 3 регистрационного досье данные о стабильности как за предыдущий сезон, так и обязательство продолжать исследования стабильности нескольких серий лекарственного препарата по программе, описанной в протоколе пострегистрационных исследований стабильности.

Результаты испытаний стабильности методом «ускоренного старения» используются для того, чтобы показать, что новые штаммы, вероятно, будут иметь те же характеристики стабильности, что и штаммы, которые используются в исследованиях стабильности, на которых основан срок годности (срок хранения).

ПРИЛОЖЕНИЕ № 1

к главе 28 Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза

УКАЗАНИЯпо качеству штаммов-кандидатов для производствавакцин для профилактики гриппа, полученныхв культурах клеток

1. Общие положения

В настоящем документе изложены указания, касающиеся требований к качеству культур клеток, используемых для выделения штаммов-кандидатов для производства вакцин для профилактики гриппа; условиям, при которых выделяются вирусы, последующего пассирования вирусов до того момента как производителем будет подготовлен главный посевной материал.

Многие производители инактивированных вакцин для профилактики гриппа разрабатывают собственные процессы культивирования вирусов в подходящих культурах клеток. Для получения посевного материала выбираются рекомендованные ВОЗ штаммы-кандидаты, полученные с использованием развивающихся куриных эмбрионов: изолят дикого типа, выделенный в развивающихся куриных эмбрионах или высокоурожайный реассортант, особенно для вируса гриппа типа А. Реассортанты и штаммы-кандидаты дикого типа получают в одной из специализированных лабораторий ВОЗ, сотрудничающих центрах ВОЗ по гриппу и других сертифицированных лабораториях, специализирующихся на разработке штаммов-кандидатов.

Наибольшее предпочтение при производстве «культуральных» вакцин отдается штаммам-кандидатам, выделенным в культуре клеток вместо штаммов-кандидатов, выделенных в развивающихся куриных эмбрионах, поскольку вирус гриппа человека, адаптированный для репродукции в развивающихся куриных эмбрионах подвергается фенотипическим и генотипическим изменениям. Вирусы гриппа человека, выделенные и в последующем пассируемые в этих же культурах клеток млекопитающих, по сравнению с репродукцией в развивающихся куриных эмбрионах менее подвержены таким изменениям, и, как правило, гемагглютинин вируса, который выделен и размножен в культуре клеток, генетически и фенотипически ближе к вирусу, обнаруживаемому в клинических изолятах, в отличие от адаптированных к развивающимся куриным эмбрионам вариантов, в которых были идентифицированы специфические замены аминокислот гемагглютинина.

Производители культуральных вакцин для профилактики гриппа как правило не используют адаптированные к репродукции в развивающихся куриных эмбрионах вирусы, которые с точки зрения антигенов отдалены от вирусов гриппа дикого типа. Некоторые сотрудничающие центры ВОЗ разрабатывают штаммы-кандидаты в линиях клеток, аттестованных для получения этих штаммов-кандидатов для производства вакцин.

Основная проблема получения штаммов-кандидатов для производства вакцин в аттестованных линиях клеток – возможность контаминации посторонними агентами, которые могут потенциально присутствовать в источнике культуре клеток, материалах используемых при выделении и культивировании производственного штамма-кандидата. В настоящем документе описаны требования к:

качеству культур клеток, которые применяются при выделении вируса;

условиям, при которых изолируют вирусы;

последующему пассированию этих вирусов до получения главного посевного материала производителем.

Настоящий документ распространяется на штаммы-кандидаты, выделенные в культуре клеток для производства вакцин с использованием в качестве субстрата для репродукции вируса культуры клеток или развивающихся куриных эмбрионов.

Производителям необходимо учитывать требования общей фармакопейной статьи на клеточные субстраты для производства вакцин для медицинского применения Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – требования общих фармакопейных статей (монографий) фармакопей государств-членов.

Происхождение и история пассажей штаммов вируса должны быть одобрены уполномоченными органами (экспертной организацией) государств-членов.

2. Требования к клеточным субстратам, используемым для выделения вируса

В исследованиях вирусов гриппа и в разработке вакцин в качестве клеточных субстратов используют такие культуры клеток, как MDCK, Vero и первичных клеток, выделенных из кур. Если используется линия клеток, клетки необходимо получать из системы банка клеток.

Вирусная и микробиологическая безопасность клеточных линий животного происхождения должна отвечать требованиям общей фармакопейной статьи для производства вакцин для медицинского применения Фармакопеи Союза на клеточные субстраты, а при отсутствии в ней – требованиям общих фармакопейных статей (монографий) фармакопей государств-членов.

Должны быть известны происхождение клеточных субстратов, источник получения, в том числе характеристики питательной среды, которая использовалась для культивирования. Должны быть проведены испытания на подлинность и чистоту.

Проведение испытаний на туморогенность для линий клеток, для которых уже имеется соответствующая информация (например, MDCK, Vero, PerC.6 или первичные клетки, выделенные из птиц) не требуется.

Для выделения вируса гриппа используются культуры клеток, аттестованные для производства вакцин для медицинского применения, которые соответствуют требованиям Фармакопеи Союза, при отсутствии в ней – требованиям фармакопей государств-членов.

Производителю следует учитывать, что при использовании некоторых линий клеток (например, Vero), при культивировании и выделении из клинических изолятов вируса гриппа существует высокий риск одновременного культивирования и выделения сопутствующих вирусов человека.

3. Работа с клетками, выделение и культивирование вируса

Производителям необходимо тщательно подходить к вопросу описания состава и источника сред и всех манипуляций с клетками, в том числе при пассировании клеток, выделении и культивировании вируса. Необходимо использовать компоненты, неживотного происхождения. Если используются какие-либо материалы, полученные от человека или животных, в этих материалах не должно быть возбудителей инфекций. Бычью сыворотку, используемую для подготовки и культивирования культур клеток, необходимо подвергать воздействию рентгеновских лучей (X-ray). В отношении вирусной безопасности сырья биологического происхождения, необходимо представить соответствующие подтверждающие документы. Необходимо руководствоваться требованиями актов органа Союза по обеспечению безопасности при использовании бычьей сыворотки в процессе производства лекарственных препаратов и требованиям Фармакопеи Союза по минимизации риска передачи губчатой энцефалопатии животных.

Работу с вирусами необходимо выполнять в специально отведенном для этого боксе микробиологической безопасности в асептических условиях. Одновременно допускается работа только с одним вирусным изолятом.

Необходимо рассмотреть возможность более длительного промежутка очистки при работе с различными подтипами вируса гриппа. В лаборатории должна иметься специализированная система хранения клеток и штаммов-кандидатов для производства вакцины, описание процедуры работы (СОП). Информация о хранении банков клеток и системе используемых банков клеток должна быть документирована.

4. Обеспечение качества

Необходимо представить гарантии того, что все процедуры по культивированию клеток и вирусов выполняются полностью обученным (или проходящим обучение) персоналом в предназначенных для этого помещениях с использованием специального оборудования. Документация должна позволять полностью проследить применяемые технологические процедуры, работу оборудования, происхождение материалов и оценить подготовку персонала. Несмотря на то, что производители могут получать штаммы-кандидаты для производства вакцин из лабораторий ВОЗ, держатели регистрационных удостоверений несут ответственность за соответствие своего главного посевного материала требованиям качества для использования в процессе производства.

Если при производстве вакцины используется штамм-кандидат, полученный с использованием культур клеток, а в качестве субстрата для репродукции штамма-кандидата – развивающиеся куриные эмбрионы, то это не должно оказывать влияния на требования к качеству производимой в развивающихся куриных эмбрионах вакцины.

ПРИЛОЖЕНИЕ № 2

к главе 28 Правил проведения исследований

биологических лекарственных средств

Евразийского экономического союза

ПРИМЕРЫописания разработки штамма-кандидата для производства вакцин для профилактики гриппа

I. Пример схемы описания разработки штамма-кандидата для производства вакциндля профилактики гриппа, полученного с помощью методов обратной генетики

Описание вируса: полученный с помощью метода обратной генетики реассортантный вирус с соотношением генов 2:6 от штаммов A/abc/123/04 и A/PR/8/34.

История пассажа: культура клеток Vero x1, развивающиеся куриные эмбрионы x1

Параметр

Стандартные операционные процедуры (применяемые методы)

Результаты (комментарии)

Репродукция штамма вируса гриппа A/abc/123/03 в развивающихся куриных эмбрионах

СОП xyz2, в условиях 4-го уровня биологической безопасности (BSL4)

вирус гриппа дикого типа, выращенныйв развивающихся куриных эмбрионах, полученный из ...

Клонирование и генетическая модификация сегмента гемагглютинина штамма A/abc/123/04

стандартные молекулярно-биологические методы

сегмент гемагглютинина штамма A/abc/123/04, клонированный с вырезанным полиосновным сайтом расщепления и с введенными стабилизирующими мутациями

Секвенирование клонированного гена гемагглютинина

секвенирование плазмидной ДНК

A/abc/123/04-подобный вирус без полиосновных аминокислот в сайте расщепления

Клонирование сегмента нейраминидазы штамма A/abc/123/04

стандартные молекулярно-биологические методы

сегмент нейраминидазы штамма A/abc/123/04 клонирован без дальнейших модификаций

Секвенирование клонированного гена нейраминидазы

секвенирование плазмидной ДНК

A/abc/123/04-подобный вирус

Плазмиды PR8

стандартные молекулярно-биологические методы

подготовлены ...

или представлены ...

Плазмиды

СОП xyz2

использованы плазмиды HAxx и NAzz, плюс 6 генов PR8 и 4 плазмиды-помощника

Клетки Vero

СОП xyz2

клетки прошли валидацию для производства вакцин для медицинского применения

Обратная генетика

СОП xyz2

реассортантный вирус выделенный из трансфецированных клеток Vero прошел 2 пассажа; титр гемагглютинина abc3

________________

1 «х» – количество пассажей;

2 «xyz» – номер стандартной операционной процедуры;

3 «abc» – значение титра.

II. Пример спецификации штамма-кандидата, полученного с помощью метода обратной генетики

Описание вируса: полученный с помощью метода обратной генетики реассортантный вирус с соотношением

генов 2:6 от штаммов A/abc/123/04 и A/PR/8/34.

История пассажа: клетки Vero x1, развивающиеся куриные эмбрионы x1

Параметр

Стандартная операционная процедура (метод контроля)

Референтные значения

Результат

Анализ антигенов вируса

СОП xyz2

A/abc/123/04-подобный вирус

соответствуют спецификации

Титр вируса

СОП xyz2

неприменима

гемагглютинирующий титр составляет ...

Инфекционная активность в развивающихся куриных эмбрионах

СОП xyz2

неприменима

10×ЭИД50/мл

Последовательность гемагглютинина вируса

ПЦР с обратной транскрипцией (циклическое секвенирование)

A/abc/123/04-подобный вирус без полиосновных аминокислот в сайте расщепления

соответствует спецификации

Последовательность нейраминидазы вируса

ПЦР с обратной транскрипцией (циклическое секвенирование)

A/abc/123/04-подобный вирус

соответствует спецификации

Испытание патогенности для цыплят

СОП xyz2

индекс внутривенной патогенности = 1,2или ниже

результат составляет ...

соответствует спецификации

Испытание патогенности для хорьков

СОП xyz2

титр вируса, выявляемый в органах дыхательной системы не должен быть выше, чем у родительских штаммов.

Репликация вируса происходит только в дыхательных путях

клинические симптомы (или их отсутствие) свидетельствуютоб аттенуации вируса

соответствует спецификации

Испытание на куриных эмбрионах

СОП xyz2

эмбрионы остаются живыми

соответствует спецификации

Стерильность

СОП xyz2

отвечает требованиям

соответствует спецификации

Контаминация вируса плазмидной ДНК

ПЦР

неприменима

результат составляет ...

Материалы животного происхождения, использованные при получении вируса

Контроль материалов

соответствие Фармакопеи Союза по минимизации риска передачи губчатой энцефалопатии животных

соответствуют спецификация

1 «х» – количество пассажей;

2 «xyz» – номер стандартной операционной процедуры.

1. Общие положения

Положения настоящей главы распространяются на процедуры регистрации вакцин для профилактики гриппа и определяют единый порядок проведения доклинических и клинических исследований при регистрации сезонных, пандемических и препандемических (зоонозных) вакцин для профилактики гриппа на таможенной территории Союза, а также при внесении изменений в регистрационное досье зарегистрированных сезонных, пандемических и препандемических (зоонозных) вакцин при изменении (обновлении) штаммового состава вакцин для профилактики гриппа.

Положения настоящей главы распространяются на следующие типы вакцин для профилактики гриппа:

живые аттенуированные вакцины для профилактики гриппа (ЖГВ);

инактивированные расщепленные, субъединичные и цельновирионные вакцины;

вакцины, содержащие адъюванты.

Положения настоящей главы также применимы к:

инактивированным вакцинам, содержащим альтернативные вакцинные антигены (например, не содержащим цельные молекулы гемагглютинина);

вакцинам, содержащим рекомбинантные поверхностные антигены;

ДНК-вакцинам, экспрессирующим поверхностный антиген (антигены);

вакцинам на основе вирусоподобных частиц.

По вопросам регистрации в отношении всех новых вакцин, к которым положения настоящей главы не применяются в полной мере, заявители вправе обратиться за научной консультацией к уполномоченным органам (экспертным организациям) государств-членов.

К новым вакцинам относятся:

вакцины, которые сходны с зарегистрированной вакциной по типам антигенов и ожидаемому взаимодействию с иммунной системой (например, четырехвалентные инактивированные вакцины для профилактики гриппа, производимые аналогично трехвалентным инактивированным вакцинам);

вакцины, содержащие новую конструкцию или подход к технологии получения (например, консервативные белки или эпитопы белков вируса гриппа).

Настоящая глава дополняет требования Правил надлежащей клинической практики Евразийского экономического союза, Правил лабораторной практики и Правил практики фармаконадзора в части особенностей организации и проведения всех видов исследований вакцин для профилактики гриппа.

2. Определения

Для целей настоящей главы используются понятия, которые означают следующее:

«вакцина готовности к пандемии» – кандидатная вакцина (или технология приготовления вакцины) для профилактики гриппа, разрабатываемая в целях иммунизации населения в случае возникновения гриппа, вызванного пандемическими штаммами вируса гриппа;

«новая вакцина» – впервые регистрируемая вакцина для медицинского применения, имеющая иной антигенный состав, конструкцию или технологию получения по сравнению с уже зарегистрированными вакцинами на таможенной территории Союза;

«пандемическая вакцина» – вакцина для профилактики гриппа, предназначенная для иммунизации населения в случае возникновения гриппа, вызванного пандемическими штаммами вируса гриппа;

«препандемическая (зоонозная) вакцина» – вакцина для профилактики гриппа, содержащая новый штамм вируса гриппа животного происхождения с пандемическим потенциалом (зооноз –инфекционное заболевание, передающееся от животных человеку);

«сезонная вакцина» – вакцина для профилактики гриппа, вызываемого эпидемическими штаммами вируса гриппа, предназначенная для ежегодной иммунизации населения.

3. Требования к проведению доклиническихисследований для регистрации сезонных вакцин всех типовдля профилактики гриппа

3.1. Исследования первичной фармакодинамики

Оценка иммуногенности вакцин

Оценку иммуногенности вакцин для профилактики гриппа необходимо проводить с использованием мелких видов экспериментальных животных, наиболее чувствительных в отношении вакцин для профилактики гриппа (например, крыс, хомяков, морских свинок, мышей и хорьков).

Исследования иммуногенности вакцин для профилактики гриппа должны предусматривать:

оценку гуморального, а также клеточного иммунного ответа;

оценку соотношения «доза – эффект» путем исследования эффекта различных доз антигена при введении вакцины.

При разработке дизайна доклинических исследований необходимо принимать во внимание планируемый способ введения вакцины, поскольку он может повлиять на тип индуцируемого иммунного ответа. Иммунный ответ необходимо оценивать после введения каждой дозы вакцины. По результатам серологических исследований необходимо получить данные о кросс-нейтрализующих антителах и кросс-реактивности пандемических, препандемических (зоонозных) и сезонных вакцин с адъювантом в отношении гетерологичных штаммов вирусов гриппа (оценка кросс-реактивности). Исследования иммуногенности на животных служат подтверждением воспроизводимости процесса производства, в частности, в ходе фазы валидации процесса производства разрабатываемой вакцины. Вместе с тем, учитывая принцип 3R (замена, улучшение и сокращение (replacement, refinement, reduction)) с целью минимизации количества привлекаемых к исследованию животных оценку иммуногенности целесообразно проводить также с использованием подходов in vitro или с учетом возможности получения соответствующих данных в клинических исследованиях.

Протективность (защитные свойства) вакцин

Оценку протективности, как наиболее надежный метод оценки специфической активности, необходимо проводить для гриппозных вакцин с новыми механизмами действия на релевантной модели животных. Эти исследования позволяют подтвердить защитную эффективность против штамма, входящего в состав разрабатываемой вакцины, предназначенной для клинических исследований.

Также исследования протективности необходимо проводить в тех случаях, когда соответствующие клинические данные при применении у человека отсутствуют (например, при разработке пандемических вакцин).

Наиболее адекватной моделью для исследования защитных свойств вакцин для профилактики гриппа (при условии, что исследуемый штамм вируса гриппа хорошо реплицируется и вызывает симптоматическую инфекцию) являются хорьки, поскольку патогенез заболевания, клиническая симптоматика, включая лихорадку, и механизмы формирования иммунитета схожи с таковыми у человека. Оценка протективности вакцин для профилактики гриппа на мышах нецелесообразна, поскольку хорьки обладают наиболее высокой восприимчивостью к заражению вирулентными штаммами вируса гриппа.

Вирус гриппа, используемый для заражения животных в ходе оценки протективной активности вакцин, должен соответствовать штамму дикого вируса, из которого получен вакцинный штамм. В исследованиях используют животных, не переносивших гриппозную инфекцию. В некоторых случаях хорьков необходимо праймировать штаммами другого серотипа вируса гриппа (например, если они являются «наивными» по определенным штаммам вируса гриппа или в случае использования слабоиммуногенных штаммов). В протокол исследования необходимо включить обоснование и информацию об исходном иммунном статусе хорьков.

Дизайн исследования может различаться в зависимости от типа исследуемой вакцины. Оценку протективности необходимо проводить при интраназальном способе заражения.

При должном обосновании, также допустим интратрахеальный способ заражения. Для заражения животных предпочтительно использовать высокие инфекционные дозы вируса (~105 ИД50 или летальную дозу, если она известна). Основными конечными точками исследования протективности вакцин для профилактики гриппа являются:

неспецифические симптомы заболевания, такие как повышение температуры тела, изменение веса, аномалии в поведении животных, клинические проявления заболевания (например, чихание), повышение числа лейкоцитов, макроскопическая и гистологическая оценка органов, а также летальность;

инфекционные маркеры, такие как выделяемость вируса (с помощью назальных смывов, полученных в разное время), инфекционная активность вируса гриппа, кинетика репликации вируса (животных необходимо умерщвлять в разное время, извлекая образцы биологического материала как верхних, так и нижних дыхательных путей).

Как правило, не допускается предусматривать летальность в качестве единственной конечной точки протективности вакцины в исследованиях на хорьках, поскольку, с учетом принципов 3R (замена, улучшение и сокращение (replacement, refinement, reduction)), такие исследования не всегда предусматривают умерщвление животных.

Оценку кросс-протективности вакцин проводят путем заражения животных гетерологичным вирусом (вирусом отличным от вакцинного штамма). Такую оценку проводят для препандемических (зоонозных), пандемических и сезонных вакцин с адъювантом с целью подтверждения более широкой протективности.

Пассивная иммунизация

Исследования пассивной иммунизации животных позволяют оценить уровень защиты, индуцированный у «наивных» (неиммунизированных) животных после пассивного переноса антиген-специфических сывороток от иммунизированных животных или сывороток от вакцинированных людей. На основании полученных результатов делается вывод о том, может ли индуцированный вакциной гуморальный иммунный ответ обеспечить защиту от инфекции. Такие исследования особенно актуальны при оценке вакцин, предназначенных для невоспроизводимых (non-replicating) пандемических и зоонозных заболеваний, где целью является определение протективного титра антиген-специфических нейтрализующих антител. 3.2. Исследования фармакологической безопасности

Общие исследования фармакологической безопасности вакцин для профилактики гриппа, как правило, не требуются. Вместе с тем необходимо анализировать нежелательное действие на сердечно-сосудистую и дыхательную системы, а также на параметры центральной нервной системы, особенно при включении в состав вакцины адъюванта, или если эти органы являются мишенями для развития патогенеза вируса дикого типа (важно в отношении ЖГВ). Эти параметры необходимо включать в дизайн токсикологических исследований и исследований иммуногенности.

3.3. Фармакокинетические исследования

Исследования с целью определения концентрации антигенов в сыворотке не требуются. Специальные исследования проводятся с учетом типа вакцины, в отношении нового состава или адъювантов, либо при альтернативных способах введения (например, реакция в месте инъекции, исследования распределения и вирусовыделения в случае использования ЖГВ).

3.4. Токсикологические исследования

Токсикологические исследования необходимо проводить с использованием вакцины, содержащей тот же штамм что и разрабатываемая вакцина, предназначенная для применения в клинической практике.

При проведении доклинических исследований безопасности, уровни доз по содержанию антигена и вводимому объему должны быть эквивалентны дозе, предлагаемой для применения у человека. Вместе с тем необходимо представить научное обоснование адекватности выбранной дозы в отношении экспериментальных животных.

В отношении новых вакцин, процесс производства которых схож с процессом производства зарегистрированных вакцин, повторное проведение доклинических токсикологических исследований не требуется, в случае если эти исследования проведены в соответствии с Правилами надлежащей лабораторной практики, результаты представлены в полном объеме и имеют достаточную научную достоверность, а также представлено обоснование возможности экстраполяции данных на разрабатываемую вакцину.

Изучение токсичности при однократном введении предпочтительно проводить в рамках изучения токсичности при повторном (многократном) введении.

Исследования токсичности при повторном(многократном) введении

Токсикологические исследования разрабатываемой вакцины проводятся с использованием одного релевантного вида животных (например, крыс, хорьков, кроликов и т. д.). Дизайн исследования должен в наиболее полной мере отражать количество доз и частоту введения вакцины, запланированной при применении в клинических условиях. Интервалы дозирования могут быть короче (например, 2-3-недельными) с учетом специфики и различий в кинетике иммунного ответа, индуцируемого различными типами вакцин для профилактики гриппа.

В рамках исследования по изучению токсичности при повторном (многократном) введении, предусматривается включение конечных точек, необходимых для оценки иммунотоксических и аллергизирующих свойств вакцин (если не обосновано иное).

В случае использования адъювантов в составе вакцин требуется проведение оценки иммунотоксичности и реакций гиперчувствительности (в соответствии с главой 16 настоящих Правил).

Исследование репродуктивной токсичности

Изучение фертильной (эмбрио-фетальной, пренатальной) постнатальной токсичности должно включать как минимум 1 исследование с использованием одного вида животных. Дизайн исследования должен отражать планируемую схему клинического применения вакцины. Вакцинацию необходимо проводить перед спариванием животных и в ходе гестации.

Генотоксичность и канцерогенность

Исследования генотоксичности и канцерогенности вакцин для профилактики гриппа, как правило, проводить не требуется.

Отдельное внимание необходимо уделить адъювантам (в соответствии с главой 16 настоящих Правил) и другим компонентам, входящим в состав вакцины.

Исследования местной переносимости

Оценка местной переносимости осуществляется в рамках исследований по изучению общетоксического действия при однократном или повторном (многократном) введении. В случае проведения отдельных исследований по оценке местной переносимости, их необходимо проводить на животных соответствующего вида (кроликах (если не обосновано иное)). Следует использовать состав вакцины, предназначенный для клинического применения.

3.5. Оценка экологических рисков

Аминокислоты, пептиды, белки, углеводы и липиды, входящие в состав вакцины, не попадают под требования к проведению оценки экологических рисков, поскольку маловероятно, что они приведут к существенному риску для окружающей среды. В связи с этим для инактивированных вакцин на основании природы их компонентов оценка экологических рисков не требуется.

3.6. Дополнительные доклинические исследованияотдельных видов сезонных вакцин для профилактики гриппа

Вакцины с адъювантом

Исследования вакцины с адъювантом проводятся с учетом требований главы 16 настоящих Правил. Должно быть дано объяснение механизма действия вакцин с адъювантом. Необходимо изучить количественные и качественные аспекты иммунного ответа. В целях получения дополнительных необходимых сведений о механизме действия адъюванта следует разработать модельные системы in vitro.

Методология, используемая для изучения токсичности адъювантов, должна соответствовать методологии изучения вакцины. При проведении доклинических исследований безопасности вакцин с адъювантом необходимо проводить оценку местной переносимости (реактогенности), изменения температуры тела и иммунотоксичности (например, индукции гиперчувствительности и анафилактической реакции).

Требования к проведению исследований иммуногенности вакцин с адъювантом на доклиническом этапе включают в себя оценку оптимального соотношения адъювант/антиген путем исследования эффекта комбинации различных доз адъюванта с различными дозами антигена вакцины.

Вопрос об экстраполяции данных, полученных в исследованиях на животных, требует специального рассмотрения и должен решаться с большой осторожностью. Известно, например, квасцы усиливают иммуногенность инактивированных расщепленных вакцин у мышей, хорьков и макак, однако у человека данного действия не наблюдается.

Необходимо отдельно изучить профиль безопасности новых адъювантов или адъювантных систем, не имеющих данных по их медицинскому применению, особенно в комбинации с новыми типами антигенов.

Живые аттенуированные сезонные вакциныдля профилактики гриппа (ЖГВ)

В отношении живых аттенуированных сезонных вакцин для профилактики гриппа необходимо учесть следующее:

а) исследование первичной фармакодинамики. Ввиду отсутствия доказательных сведений о корреляции между системным гуморальным иммунным ответом и протективностью (защитными свойствами) ЖГВ, оценка гуморального иммунного ответа не является критерием подтверждения эффективности данного типа вакцин для профилактики гриппа. Вместе с тем исследования протективности являются научно-обоснованным методом подтверждения эффективности таких вакцин, и их проведение необходимо. Исследования протективности (защитных свойств) должны подтвердить, что исследуемая вакцина способна предотвращать или существенно подавлять репликацию вируса дикого типа в тканях легкого животного и существенно снижать уровень репродукции вируса в верхних дыхательных путях.

Протективность вакцины оценивают по репродукции вируса в носовых смывах иммунизированных животных после заражения диким (патогенным) вирусом гриппа. Необходимо оценить потенциальную передачу интактным животным выделяемого вакцинного вируса;

б) фармакокинетические исследования. Необходимо проведение исследований депонирования и распределения в месте введения, а также исследований, позволяющих охарактеризовать интраназальные спреи.

Исследования должны быть проведены с использованием необходимых образцов тканей и органов с целью получения совокупности данных фармакокинетического профиля ЖГВ, кинетики распределения и оценки потенциальных рисков возникновения реверсии.

В исследованиях, как правило, достаточно использования одного вида животных, выбор которого необходимо обосновать соответствующим образом. Исследования распределения включают в себя оценку восстановления вирулентности вакцинального штамма вируса гриппа, обнаружение вирусных антигенов или вирусного генетического материала. Необходимо исключить потенциальное гематогенное распространение вакцинального вируса;

в) нейровирулентность. Необходимо изучить потенциальную нейровирулентность новых вакцинных штаммов и оценить ее в экспериментах на мышах, используя в качестве контроля вирулентный штамм;

г) токсикологические исследования. Для оценки репродуктивной токсичности (фетальной токсичности и влияние на репродуктивную функцию) вследствие возможной реверсии патогенных свойств штамма вируса гриппа особое внимание необходимо уделить выбору соответствующей модели животных (например, хорьки). Используя соответствующие модели животных (например, хорьков), необходимо изучить неблагоприятное влияние на слизистые поверхности носа, вызванное вакцинными штаммами вируса гриппа, либо вспомогательными веществами, входящими в состав препарата;

д) оценку экологических рисков. Необходимо изучить риск реассортации между диким вирусом и штаммами живых вакцинных вирусов, а также потенциальный риск распространения их среди людей и животных.

4. Требования к проведению доклинических исследованийдля внесения изменений в штаммовый состав вакциндля профилактики гриппа

4.1. Сезонные вакцины для профилактики гриппа

Представлять данные доклинических исследований при обновлении штаммов сезонных вакцин для профилактики гриппа, как правило, не требуется.

4.2. Пандемические и препандемические (зоонозные) вакцины для профилактики гриппа

В случае отсутствия данных по иммуногенности, полученных в ходе ранее проведенных исследований с участием человека, при подаче заявления на изменение или обновление штаммового состава вакцины для профилактики гриппа допускается представлять результаты исследований иммуногенности и протективности (защитных свойств) инактивированных вакцин, полученные в ходе исследований на животных, в соответствии с пунктами 8 – 18 настоящей главы.

Для живых аттенуированных вакцин для профилактики гриппа принимая во внимание отсутствие доказанной корреляции между системным гуморальным иммунным ответом и протективностью, главным критерием оценки эффективности являются исследования защитных свойств данного типа вакцины у животных.

5. Требования к проведению клинических исследованийдля регистрации сезонных вакцин различных типовдля профилактики гриппа

5.1. Сезонные инактивированные вакциныдля профилактики гриппа, не содержащие адъювант

При подаче заявления о регистрации новой инактивированной сезонной вакцины для профилактики гриппа не содержащей адъювант, состав и процесс производства которой аналогичен зарегистрированной инактивированной вакцине, ранее подвергшейся экспертизе уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов, допускается представлять данные сравнительных исследований безопасности и иммуногенности в отдельных группах лиц, описанных в пункте 43 настоящей главы.

Наиболее объективную оценку эффективности получают при вакцинации лиц, не имеющих специфических антител к определенному штамму (штаммам) в составе вакцины (перед вакцинацией требуется предварительный скрининг на наличие специфических антител в сыворотках лиц, подлежащих иммунизации). Также требуются данные по иммуногенности вакцины сравнения (препарата сравнения).

В качестве препарата сравнения используют вакцину того же типа, вводимую тем же путем, что и исследуемая вакцина (например, субъединичная вакцина для профилактики гриппа сравнивается с зарегистрированной субъединичной вакциной, расщепленная вакцина сравнивается с зарегистрированной расщепленной вакциной).

Оптимальным является использование препаратов сравнения, в отношении которых получены данные, обосновывающие их эпидемиологическую эффективность (эффективность в реальных условиях применения).

Поскольку не существует подтвержденного иммунологического коррелята защиты, демонстрация не меньшего иммунного ответа в определенных популяциях подгрупп должна преобразовываться в максимально сопоставимую протективность против гриппозной инфекции. Граница не меньшей эффективности должна учитывать любые доступные данные по выработке естественно приобретенных антител в исследуемой популяции, а также доступную информацию по иммуногенности вакцины сравнения.

Исследования у взрослых, включая пожилых лиц

Для применения вакцины для профилактики гриппа у взрослых и пожилых лиц необходимо подтверждение, что вводимая разработанная вакцина обладает иммуногенностью, по крайней мере, сравнимой с иммуногенностью препарата сравнения. Если заявитель планирует провести широкомасштабные исследования в тех странах, в которых препарат сравнения не зарегистрирован, необходимо представить обоснования применимости и возможности экстраполяции данных к исследуемой популяции. Обсуждение и одобрение плана исследований с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов обязательно.

Исследования у детей

В связи с отсутствием данных о способности данного типа вакцин обеспечивать протективный иммунный ответ и иммунологическую память в самых младших возрастных группах, для организации исследований в детской популяции необходимо руководствоваться требованиями пунктов 49 – 53 настоящей главы. Любое отклонение от указанных требований должно быть надлежащим образом обосновано.

При наличии показаний, предусматривающих применение вакцины у детей в возрасте от 6 до 36 месяцев, необходимо подтвердить профилактическую (протективную) эффективность вакцины в отношении сезонного гриппа в рандомизированном клиническом исследовании.

При наличии показаний, предусматривающих применение вакцины у детей в возрасте от 3 до 9 лет (доля первично вакцинированных, с большой вероятностью будет вариабельной), необходимо обосновать, что иммунный ответ при выбранной дозе и схеме вакцинации будет, по крайней мере, не меньше иммунного ответа при применении вакцины у детей от 6 до 36 месяцев, для которых уже была подтверждена профилактическая эффективность.

Для подтверждения сопоставимости эффективности сезонной вакцины для профилактики гриппа, не содержащей адъюванта при примененииу детей в возрасте от 3 до 9 лет и при применении у детей в возрасте от 6 до 36 месяцев, необходимо проводить сравнительный анализ подмножества сывороток крови (выбранных случайным образом), полученных у детей от 6 до 36 месяцев, участвовавших в исследовании профилактической эффективности, и сывороток крови, полученных у детей от 3 до 9 лет, с использованием одного и того же метода анализа, в одной и той же лаборатории. В случаях, когда невозможно установить профилактическую эффективность вакцины при применении у детей в возрасте от 6 до 36 месяцев, заявитель в соответствии с пунктом 26 Правил регистрации и экспертизы вправе запросить консультацию у уполномоченных органов (экспертных организаций) государств-членов с целью согласования возможного объема клинических данных, которые необходимо получить для регистрации вакцины.

В определенных случаях допускается представлять сравнительные данные по иммуногенности (например, при подаче заявления о регистрации четырехвалентной вакцины, представляются данные, полученные для аналогичной трехвалентной вакцины, зарегистрированной для применения в данной возрастной группе). Такие данные получают:

а) в проспективном рандомизированном исследовании, направленном на сравнительный анализ иммунного ответа, индуцируемого двумя различными вакцинами в этой возрастной группе;

б) путем параллельных испытаний сывороток крови, полученных в разных исследованиях.

Клинические исследования вакцин данного типа с участием детей в возрасте до 9 лет проводятся в следующей хронологии:

сначала проводятся исследования безопасности и иммуногенности у детей в возрасте от 3 до 9 лет;

после подтверждения безопасности вакцины у детей старшей возрастной группы переходят к клиническим исследованиям у детей от 6 до 36 месяцев. Для детей от 6 до 36 месяцев исследования включают оценку безопасности, иммуногенности и профилактической эффективности;

после подтверждения профилактической эффективности у детей от 6 до 36 месяцев возможно скоррелировать профилактическую эффективность вакцины на группу детей от 3 до 9 лет представлением сравнительных данных по иммуногенности сывороток крови, полученных у детей от 6 до 36 месяцев и от 3 до 9 лет.

Описанная схема применима, если исследования включают одновременно детей указанных возрастных групп. Если каждая возрастная группа будет изучаться отдельно, необходимо представить результаты оценки профилактической эффективности в каждой возрастной группе.

В случае показаний, предусматривающих применение вакцины у детей в возрасте от 9 до 18 лет, подтверждение профилактической эффективности не требуется. При подаче заявления о регистрации представляются данные прямых сравнительных исследований иммунного ответа, индуцируемого разрабатываемой вакциной в группах лиц в возрасте от 9 до 18 лет и взрослых, либо данные сравнения с зарегистрированной инактивированной сезонной вакциной для профилактики гриппа, не содержащей адъювант, показанной к применению в данной возрастной группе. Например, допустимо сравнение новой четырехвалентной вакцины с зарегистрированной четырехвалентной вакциной. В качестве альтернативы допускается представление результатов сравнения иммунного ответа, индуцируемого разрабатываемой вакциной при исследовании с участием детей в возрасте от 9 до 18 лет и в других исследованиях с той же вакциной или с соответствующей зарегистрированной вакциной при условии проведения параллельных испытаний сывороток, полученных в разных исследованиях.

Исследования у иммунокомпрометированных лиц

На момент подачи заявления о регистрации проведение специальных исследований у иммунокомпрометированных лиц не требуется, за исключением случаев, когда заявитель предполагает включить показания к применению в субпопуляциях с определенным иммунным статусом.

Иммуногенность вакцины для профилактики гриппа будет зависеть от вида и тяжести иммунодефицитного состояния. Данные об иммуногенности, полученные в отдельных подгруппах или выбранной группе иммунокомпрометированных пациентов, позволяют вносить в общую характеристику лекарственного препарата указания, учитывающие фактически изученную популяцию. Вопрос об экстраполяции данных (например, режима дозирования) за пределы фактически изученной популяции будет определяться после полного анализа этих данных.

Рандомизированные контролируемые клинические исследования для оценки профилактической эффективности вакцины у иммунокомпрометированных детей проводить не требуется. Формирование группы плацебо в этой популяции неприемлемо, поскольку сложно провести научно-обоснованное исследование, а его результаты достаточно сложно интерпретировать в связи с неизбежной гетерогенностью данных для этой группы пациентов. В связи с этим для обоснования указаний применения вакцины у иммунокомпрометированных детей (начиная с минимального возраста) необходимо накапливать данные об иммуногенности у относительно небольших выборок из педиатрической популяции с различными видами и тяжестью иммунодефицитного состояния. Необходимость применения высоких доз и (или) других режимов дозирования у иммунокомпрометированных детей устанавливается путем проведения прямых и непрямых (то есть анализ данных при проведении различных исследований) сравнительных исследований между иммунокомпрометированными и сопоставимыми по возрасту здоровыми детьми.

Исследования у пациентовс сопутствующими заболеваниями

Результаты исследований иммуногенности у пациентов с сопутствующими заболеваниями на момент подачи заявления о регистрации вакцин для профилактики гриппа не требуются. Некоторые сопутствующие заболевания могут повысить риск осложнений гриппа, но при этом не влиять на иммунный ответ и защиту от инфекции. Эти данные получают в ходе специальных исследований у подгрупп, включенных в исследования по возрастным категориям, в которых критерии исключения минимальны. Данные об иммуногенности не прогнозируют влияние на риск осложнений у лиц, у которых, несмотря на вакцинацию, развился грипп с клиническими проявлениями. Этот риск можно оценить только во время оценки эпидемиологической эффективности вакцины в пострегистрационный период.

Исследования у беременных женщин

Поскольку в отношении не содержащих адъювант инактивированных сезонных вакцин (расщепленных (сплит-) и субъединичных) доступны данные об иммуногенности, безопасности и эффективности, позволяющие применять данные вакцины у беременных во всех триместрах беременности.

Включение в общую характеристику лекарственного препарата конкретных рекомендаций о применении новой вакцины во время беременности зависит от доступных данных, характеризующих данную вакцину. Заявителю необходимо также изучить эффективность вакцины для профилактики гриппа у детей при вакцинации матери.

5.2. Сезонные инактивированные вакциныдля профилактики гриппа, содержащие адъювант

Исследования у взрослых, включая пожилых лиц

При подаче заявления о регистрации новой вакцины для профилактики гриппа на основе поверхностных антигенов вируса гриппа с адъювантом, которая предназначена для применения у взрослых и (или) пожилых лиц требуется представить научное обоснование включения адъюванта в состав вакцины. Таким обоснованием является демонстрация превосходства адъювантной вакцины по показателю иммуногенности в сравнении с вакциной, не содержащей адъювант, но в остальном сопоставимой, зарегистрированной вакциной, в отношении которой уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов была проведена соответствующая экспертиза. Также представляется обоснование включения адъюванта в состав исследуемой вакцины, исходя из данных, подтверждающих не меньшую эффективность вакцины, содержащей адъювант по показателю иммуногенности при соответствующем снижении количества антигенов в ее составе в сравнении с вакциной, не содержащей адъювант, но в остальном сопоставимой, зарегистрированной вакциной, содержащей стандартное количество антигенов.

Преимущество включения адъюванта в состав вакцины заключается в повышении частоты сероконверсии, титров антител (средних геометрических титров антител или кратности приростов титров антител), или других иммунологических параметров, включая широту и длительность иммунного ответа.

К данным, необходимым для обоснования применения у иммунокомпрометированных лиц и людей с сопутствующими заболеваниями, применимы требования, приведенные для инактивированных вакцин, не содержащих адъювант.

Исследования у детей

Включение адъюванта в состав вакцины для применения у детей необходимо обосновать с представлением . доказательства повышения иммунного ответа в сравнении с сопоставимой зарегистрированной вакциной, не содержащей адъювант. Также представляются данные, доказывающие не меньшую иммуногенность вакцины, содержащей адъювант со сниженным содержанием антигенов в сравнении с сопоставимой зарегистрированной вакциной, не содержащей адъювант и содержащей стандартное количество антигенов. Кроме того, подобно инактивированным вакцинам, не содержащим адъювант, применение вакцины, содержащей адъювант у детей в возрасте ≤ 36 месяцев необходимо обосновать результатами доказанной профилактической эффективности, полученными в клинических исследованиях. Иммунологическая активность вакцины при выбранной схеме вакцинации у детей более старшего возраста, по крайней мере, не должна уступать зарегистрированной вакцине для применения у детей аналогичного возраста, для которой экспериментально подтверждена эффективность. В качестве альтернативы, при определенных обстоятельствах, заявитель вправе подать заявление о регистрации вакцины, для которой показан меньший иммунный ответ по сравнению с другой вакциной, содержащей адъювант, в отношении которой эффективность подтверждена и документирована.

Исследования у беременных женщин

Для некоторых сезонных вакцин, содержащих адъювант проводились контролируемые клинические исследования с участием беременных женщин. Имеются данные о безопасности и эпидемиологической эффективности моновалентных пандемических вакцин, содержащих адъювант при применении во втором и третьем триместрах беременности.

При составлении общей характеристики лекарственного препарата необходимо учитывать все имеющиеся и значимые данные вакцинации беременных женщин. В зависимости от характеристик новой вакцины и нового адъюванта имеющиеся данные могут обосновывать или противопоставлять включение в общую характеристику лекарственного препарата рекомендации по применению вакцины во время беременности.

5.3. Сезонные живые аттенуированные вакциныдля профилактики гриппа

Для сезонных живых аттенуированных вакцины для профилактики гриппа в связи с отсутствием доказательных сведений о корреляции между параметрами иммунного ответа и протективностью, заявитель вправе подать заявление о регистрации только на основании подтверждения профилактической эффективности вакцины в конкретных популяциях, для определенной возрастной группы.

При изменении лекарственной формы или средства доставки уже зарегистрированной вакцины, по предварительному согласованию с регуляторными органами, допускается проведение сравнительных исследований иммуногенности вакцин.

5.4. Прочие виды вакцин (новые вакцины)

При разработке новых типов вакцин для профилактики сезонного гриппа (например, рекомбинантные вакцины), для которых отсутствуют соответствующие препараты сравнения, зарегистрированные или в отношении которых проведена экспертиза уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов, для подачи заявления на регистрацию требуется подтверждение профилактической эффективности разрабатываемой вакцины в клинических исследованиях в конкретных популяциях, при применении у лиц определенного возраста.

Заявителям необходимо получить одобрение альтернативных стратегий исследования уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов на ранних этапах разработки протокола клинических исследований (например, для согласования возможного подтверждения эффективности в определенных возрастных и популяционных подгруппах с последующей экстраполяцией на остальные группы, основываясь на полученных данных иммуногенности).

6. Требования к проведению клинических исследованийдля внесения изменений в штаммовый состав вакциндля профилактики гриппа

В связи с потенциалом изменчивости вирусов гриппа и циркуляцией эпидемически активных штаммов, ВОЗ дважды в год(в феврале для северного полушария и в сентябре для южного полушария), обновляет рекомендации в отношении сезонной вакцины для профилактики гриппа (для каждого из полушарий).

На основании этой рекомендации замена штаммового состава в зарегистрированных вакцинах осуществляется посредством внесения изменений в их регистрационное досье (в соответствии с приложением № 24 к Правилам регистрации и экспертизы).

Допускается не представлять данные клинических исследований при изменении или обновлении штаммов сезонных вакцин для профилактики гриппа. Вместе с тем необходимо обеспечить пострегистрационные наблюдения посредством проведения мониторинга безопасности и эпидемиологической эффективности такой вакцины (в соответствии с Правилами практики фармаконадзора, пунктами 130 – 144 и разделом 10 настоящей главы).

7. Требования к проведению доклинических и клиническихисследований для регистрации пандемических вакциндля профилактики гриппа и внесения измененийв их штаммовый состав

В целях подготовки к пандемии производители вакцин подают заявление о регистрации пандемической вакцины (вакцину готовности к пандемии). При официальном признании пандемии (объявления ВОЗ в установленном порядке пандемической ситуации или объявления соответствующими уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов эпидемии, вызванной пандемическим штаммом вируса гриппа) заявитель вправе представить заявление на изменение штаммового состава с целью включения штамма с пандемическим потенциалом в пандемическую вакцину («обновление пандемического штамма»). Заявление о регистрации вакцины готовности к пандемии необходимо обосновать данными о соответствующих штаммах (штамме) (в соответствии с приложением № 24 к Правилам регистрации и экспертизы).

7.1. Требования к исследованиям вакциныготовности к пандемии в целях ее регистрации

Заявление о регистрации вакцины готовности к пандемии должно содержать данные с аналогичными характеристиками, что и планируемая для применения вакцина против пандемического штамма вируса гриппа, а именно, единую технологию приготовления, состав вакцины (за исключением штамма (штаммов)), в частности, содержание антигена, вспомогательных веществ, адъюванта (в случае необходимости) и др., а также показатели, заложенные в спецификацию вакцины и методы контроля качества. Регистрационное досье должно содержать данные по безопасности и иммуногенности вакцины, содержащей штамм с пандемическим потенциалом, со слабовыраженными иммуногенными свойствами и к которому большое количество людей не имеет специфического иммунитета (вследствие отсутствия перенесения такого гриппа в анамнезе; например, H5N1). Эта стратегия позволяет определить режим дозирования, который, скорее всего, окажется схожим, если очередная пандемия будет вызвана этим штаммом. Данные по безопасности и иммуногенности такой же вакцинной конструкции, содержащей другие потенциальные пандемические штаммы и сезонные штаммы, включаются в регистрационное досье в качестве дополнительного подтверждения (если эти данные значимы для принятия решения о регистрации вакцины).

Инактивированные вакцины готовности к пандемии

Для подачи заявления о регистрации инактивированной вакцины готовности к пандемии необходимо представить данные по безопасности и иммуногенности, полученные в соответствии с требованиями, описанными в пункте 74 настоящей главы.

Для оценки эффективности вакцины в случае возникновения пандемии, требуется проведение исследований двух или более образцов вакцины одной и той же конструкции (состава), содержащих слабоиммуногенные штаммы, которыми большинство людей не инфицировалось. В регистрационное досье необходимо включить все полученные ранее данные по безопасности и эффективности в отношении той же или сходной (в зависимости от особенностей производственных процессов) конструкции (состава) вакцины, зарегистрированной и подвергшейся экспертизе уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов (например, сезонные или препандемические вакцины).

Регистрационное досье должно содержать данные по безопасности и иммуногенности, полученные при применении у здоровых взрослых в возрасте 18 лет и старше, включая лиц, начиная с 60 лет и старше. В зависимости от степени риска (насколько это возможно), необходимо получить данные по безопасности и иммуногенности вакцины при применении у здоровых детей (данные применения у детей также допускается получать, используя результаты применения препандемической вакцины, если она зарегистрирована). Исследования по применению моновалентных пандемических вакцин с адъювантом (например, расщепленной и субъединичной вакцины с антигенным составом H1N1v) у беременных подтверждают иммуногенность и эпидемиологическую эффективность, а также безопасность, что может служить обоснованием применения этих вакцин во всех триместрах беременности. Тем не менее, при составлении общей характеристики лекарственного препарата необходимо учитывать все доступные и значимые данные применения у беременных.

В ходе пандемии необходимо оценить эпидемиологическую эффективность вакцины в соответствии с представленным планом управления рисками (в соответствии с разделом 10 настоящей главы).

Во время пандемии пострегистрационные исследования должны включать в себя мониторинг безопасности и эпидемиологической эффективности в популяциях, включенных и не включенных в исследования безопасности и иммуногенности, предусмотренных в регистрационном досье.

Живые аттенуированные вакциныготовности к пандемии

Известно, что показатели гуморального системного иммунного ответа на введение ЖГВ не коррелируют с протективностью вакцины. Тем не менее при выборе режимов дозирования ЖГВ, содержащей штаммы вируса гриппа с пандемическим потенциалом, возможно проведение исследований у лиц, ранее не имевших случаев инфицирования выбранным вакцинным штаммом вируса гриппа по следующей схеме: однократная доза ЖГВ с последующим (спустя определенный срок) введением дозы инактивированной вакцины не содержащей адъювант, содержащей тот же штамм. Результаты иммунного ответа на первую и вторую дозы предоставляют информацию о способности однократной дозы ЖГВ праймировать различные возрастные группы против слабоиммуногенного штамма, к которому большинство, если не все, не имеют специфического иммунитета. Такой дизайн исследования признается обоснованным в качестве косвенного подтверждения потенциальной протективности пандемической вакцины ЖГВ при отсутствии данных об эффективности в период между пандемиями, однако его не следует расценивать в качестве образцового режима дозирования ЖГВ в пандемических условиях. Подход к выбору штаммов аналогичен подходу к выбору штаммов инактивированных вакцин.

Лица, участвующие в клинических исследованиях ЖГВ в период между пандемиями или в фазу пандемической тревоги, должны находиться в соответствующих условиях клинической изоляции. Такие исследования с участием детей в период между пандемиями недопустимы.

Данные о профилактической и (или) эпидемиологической эффективности, полученные в отношении ЖГВ, содержащей эпидемически актуальные штаммы, можно рассматривать в качестве дополнительных сведений в отношении той же конструкции (состава), содержащей штамм с пандемическим потенциалом. Требования к пострегистрационным исследованиям этих вакцин аналогичны требованиям для пострегистрационных исследований для инактивированных вакцин готовности к пандемии.

7.2. Требования к исследованиям вакциныготовности к пандемии в целях внесения измененияв ее штаммовый состав

После официального объявления ВОЗ о пандемии и объявления соответствующими уполномоченными органами государств-членов эпидемии, вызванной пандемическим типом вируса гриппа заявитель вправе представить в уполномоченный орган (экспертную организацию) референтного государства заявление о внесении изменений в состав пандемических вакцин для профилактики гриппа.

Регистрационное досье пандемических вакцин для профилактики гриппа составляется на основе неполных данных и содержит данные о качестве, имеющиеся данные клинических исследований, свидетельствующих о предполагаемой иммуногенности штамма с пандемическим потенциалом. Если представление таких данных клинических исследований невозможно, то в дальнейшем, после объявления пандемии, заявитель должен представить в уполномоченный орган (экспертную организацию) референтного государства недостающие данные клинических исследований, а в регистрационное досье включить соответствующее обоснование, привести описание недостающих данных и гарантировать их представление в будущем. В то же время необходимо активировать планы по оценке эпидемиологической эффективности вакцины, а результаты представить в срок, согласованный заявителем и уполномоченным органом (экспертной организацией) референтного государства.

В случае необходимости внесения изменений штаммового состава пандемических вакцин для профилактики гриппа в периоды между пандемиями, заявитель вправе обратиться к уполномоченным органам (экспертным организациям) государств-членов за консультацией относительно требований к представляемым данным.

7.3. Требования к проведению исследованийпри экстренной процедуре регистрации вакциндля профилактики гриппа в условиях пандемии

При объявлении ВОЗ в установленном порядке пандемической ситуации или объявления соответствующими уполномоченными органами государств-членов эпидемии, вызванной пандемическим типом вируса гриппа, регистрация новой пандемической вакцины осуществляется на основании экстренной процедуры. Если планируется экстренная процедура, необходимо как можно раньше инициировать обсуждение такой процедуры с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

Совокупность данных, требуемых для регистрации инактивированных и живых аттенуированных вакцин для профилактики гриппа, будет варьировать в зависимости от типа вакцины, и учитывать все доступные сведения, для каждой конкретной технологии производства вакцин. В случае регистрации новой технологии производства вакцин, для обоснования возможности регистрации вакцины следует представить большее количество данных по сравнению с вакциной хорошо изученной конструкции.

8. Требования к проведению доклинических и клиническихисследований для регистрации препандемических вакциндля профилактики гриппа и внесения измененийв их штаммовый состав

8.1. Требования к исследованиям препандемической (зоонозной)вакцины для профилактики гриппа в целях ее регистрации

Заявление о регистрации препандемической (зоонозной) вакцины для профилактики гриппа должно содержать данные применения такой вакцины в конкретной популяции. Например, если препандемическая вакцина, содержащая штамм A/Indonesia/05/2005 (H5N1), исследована у взрослых, то в показаниях к применению для профилактики гриппа, вызываемого A/Indonesia/05/2005 (H5N1), должно быть указано «применение только у взрослых». Заявители вправе представить дополнительные сведения в отношении той же технологии производства вакцины, но содержащей другие зоонозные штаммы.

На момент подачи заявления о регистрации препандемических вакцин данные профилактической эффективности представлять не требуется. Вместе с тем в случае применения вакцины во время вспышек инфекции, вызванной зоонозными штаммами вируса гриппа необходимо накапливать сведения об эффективности и безопасности применяемой вакцины. Для каждой вакцинированной группы вне зависимости от когорты субъектов исследования необходимо провести оценку иммунного ответа.

В заявление о регистрации вакцины должны быть включены данные о специфических антителах и иммунном ответе на введение бустерных доз в когортах каждой возрастной группы и групп риска, которые планируется отразить в показаниях к применению. В случае отсутствия в регистрационном досье таких данных необходимо проведение пострегистрационных исследований.

8.2. Требования к исследованиям препандемической (зоонозной)вакцины для профилактики гриппа в целях внесенияизменений в ее штаммовый состав

В случае появления данных, свидетельствующих о низкой кросс-реактивности (перекрестная иммуногенность) и кросс-протективности (перекрестная защита) против дрейфовых вариантов вируса необходимо внести изменения в штаммовый состав препандемической (зоонозной) вакцины. В зависимости от типа замены штамма вируса гриппа зоонозного происхождения требования о внесении изменений в регистрационное досье будут отличаться:

в случае изменения (обновления) штамма вируса гриппа зоонозного происхождения зарегистрированной вакцины другим штаммом того же подтипа (серотипа) (например, замена референс-штамма H5N1 штаммом H5N1 определенного клайда). В этом случае, при соответствующем обосновании, держатель регистрационного удостоверения вправе представить заявление о внесении изменений в регистрационное досье, содержащее только данные о производстве и качестве, касающиеся нового штамма (в соответствии с приложением № 24 к Правилам регистрации и экспертизы). Для оценки кросс-реактивности необходимо провести вакцинацию пациентов, ранее получавших зарегистрированную вакцину, вакциной с измененным штаммовым составом. Однако такие данные представляются только после согласования заявления о внесении изменений в штаммовый состав вакцины для профилактики гриппа зоонозного происхождения с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов:

в случае изменения (обновления) штамма вируса гриппа зоонозного происхождения зарегистрированной вакцины штаммом другого подтипа (серотипа), отличающегося по гемагглютинину (HA) и нейраминидазе (NA) (например, изменение (обновление) исходного штамма H5N1 другим штаммом, например, H7N7) необходимо провести оценку иммуногенности и безопасности, и провести консультации с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

9. Организационные, методическое и научные аспектыпроведения клинических исследований вакциндля профилактики гриппа

Требуется согласование программы клинических исследований с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

Объем клинических данных, выбор методов количественного определения параметров, используемых для интерпретации данных, должны быть обоснованы.

9.1. Организация и проведение клинических исследованийоценки иммуногенности вакцин для профилактики гриппа

Оценка иммуногенности вакцин для профилактики гриппа основывается на применении двух методов: реакции торможения гемагглютинации (РТГА), обнаруживающем сывороточные антигемагглютинирующие антитела, и реакции одиночного радиального гемолиза (РРГ). Ни один из этих методов не стандартизирован. Показано, что результаты, получаемые в разных лабораториях с использованием этих методов, достаточно вариабельны. Программа клинических исследований должна предусматривать проведение оценки иммуногенности с использованием методов реакции торможения гемагглютинации и реакции одиночного радиального гемолиза в надлежащим образом аттестованных лабораториях. Все испытания необходимо проводить в одной или ограниченном количестве лабораторий, используя одинаковую методику анализа. Необходимо хранить сыворотки в течение длительного времени, чтобы можно было провести повторные испытания по мере совершенствования методов испытаний (например, они могут подвергнуться повторным испытаниям в рамках процесса валидации). Заявители должны использовать валидированные методы и собственные контроли, унифицированные лабораторные протоколы и стандартные реактивы. Необходимо использовать международные стандарты вакцинных антигенов при их наличии.

Реакция нейтрализации вирусов (РН) позволяет количественно определять вируснейтрализующие антитела. Метод основан на обнаружении способности сывороток вакцинированных людей в различных разведениях блокировать репликацию вирусов при культивировании в клеточной культуре MDCK (в случае использования в реакции микропланшета – реакция микронейтрализации (РН)). Титр вируснейтрализующих антител необходимо определять в каждом исследовании, по крайней мере, у репрезентативной подгруппы исследуемой популяции, но предпочтительным является проведение анализа сывороток всех включенных в исследования лиц. Вместе с тем, аналогично реакции торможения гемагглютинации и реакции одиночного радиального гемолиза (РРГ), метод не стандартизирован, кроме того, в настоящее время имеется лишь ограниченное количество данных, что не всегда позволяет применять конкретный метод при оценке иммунологических данных. К критичным параметрам метода, оказывающим влияние на результаты, относятся:

способ учета данных;

продолжительность инкубации;

использование трипсина.

Для получения достоверных сведений требуется обоснование выбора используемой методологии и изучения ее влияния на получаемые результаты. Первое разведение образца сыворотки не должно превышать 1:10. На протяжении всей программы клинических исследований необходимо использовать одинаковую аналитическую методологию и проводить исследования в одной и той же аттестованной лаборатории.

Необходимо проводить оценку клеточного иммунитета, по крайней мере, у случайно выбранных подгрупп во всем целевом диапазоне возрастов. Оценка клеточного иммунного ответа у пожилых лиц (например, в возрасте 75 лет и старше) особенно информативна в связи с тем, что антитела, определяемые в реакции торможения гемагглютинации и реакции нейтрализации вирусов, превышающие такие же значения у взрослых лиц молодого возраста, могут не спрогнозировать протективность вакцины.

В исследованиях оцениваются количественные и качественные показатели Т-клеточного иммунного ответа. Например, необходимо проводить оценку антиген-специфичных Т-клеток (таких как Th1, Th2, регуляторные Т-клетки, Т-клетки памяти и соответствующие цитокины).

Кроме того, детальный анализ CD4+- и CD8+-Т –лимфоцитов, а также активации B-клеток памяти позволит лучше охарактеризовать влияние вакцинации на гуморальный иммунный ответ и протективность.

Допускается также проведение заявителями оценки антинейраминидазных (NА) антител, по крайней мере, у случайно выбранных подгрупп. В случае проведения клинических исследований оценки иммуногенности метод количественного определения должен быть валидирован и проводиться в аттестованных лабораториях.

Заявители также оценивают кинетику антителообразования как показателя состояния после первичной иммунизации и формирования иммунного ответа. Такие данные должны быть документированы и информативны в исследованиях, проводимых при вакцинации первично неиммунизированных лиц.

В связи с патогенностью и эпидемиологическими особенностями штаммов вируса гриппа зоонозного происхождения, необходимо провести оценку сывороток крови, полученных от лиц, вакцинированных препандемическими (зоонозными) и пандемическими вакцинами для определения следующих показателей:

кросс-реактивности – перекрестного иммунного ответа на выбранный вакцинный штамм к дрейфовым вариантам того же подтипа вируса гриппа (например H5N1) (исследования in vitro);

кросс-праймирования – сравнительные данные результатов анамнестического иммунного ответа на повторное введение не дрейфового штамма, но близкого к нему после первичной вакцинации вакцинным штаммом, и на первую дозу дрейфового штамма у ранее невакцинированной контрольной группы;

кросс-протективности (перекрестной защиты от инфекции) – если представляются данные о наличии кросс-протективности, они должны основываться на демонстрации перекрестного иммунного ответа в сыворотках, полученных от вакцинированных лиц, подкрепленные доклиническими данными.

Ввиду непрерывного штаммового дрейфа, заявителям необходимо после первичной регистрации проводить дальнейшее исследование вакцин по указанным параметрам.

Протоколы исследования должны содержать подробное описание методологий, применяемых для оценки иммунного ответа вакцинированных, а также обоснование режима взятия образцов. Если в ходе разработки программы клинических исследований требуется внести изменения, необходимо представить соответствующее обоснование.

9.2. Анализ и представление иммунологических данных

Представление данных для всех типов вакциндля профилактики гриппа

Данные по иммуногенности вакцин для профилактики гриппа, полученные с использованием методов реакции торможения гемагглютинации (и (или) реакции одиночного радиального гемолиза) и реакции нейтрализации вирусов, необходимо подробно представить для каждого штамма, входящего в состав вакцины, используя при формировании каждого отчета об исследовании стандартный подход. Как минимум для результатов каждого проведенного анализа необходимо представить следующие данные:

средние геометрические титры антител (с доверительным интервалом 95 %) и кратность приростов титров антител (соотношение превакцинных и поствакцинальных средних геометрических титров антител);

кривые обратного кумулятивного распределения, которые необходимо сопроводить таблицами с данными о доле вакцинированных лиц (в процентах), титры которых превышают определенный уровень титров на логарифмической кривой (например, титры превышающие 1:10, 1:100 и 1:1000);

фактор и уровень сероконверсии. Сероконверсию допускается определить различными способами, включая, кратность нарастания титра по сравнению с исходным уровнем и (или) появление определяемого титра у субъекта исследования с ранее не обнаруживаемыми или количественно не определяемыми антителами;

анализ подгрупп исследуемой популяции по таким факторам, как возраст и предшествующий иммунный статус;

данные об иммунологическом ответе на ревакцинацию, если она предусмотрена и необходима, основываясь на иммунологическом статусе до введения дополнительной дозы;

данные об антиген-специфичном Т-клеточном ответе, включая CD4+ Т-клетки и CD8+-цитотоксические Т-лимфоциты (ЦТЛ) и соответствующие цитокины, с учетом их исходного уровня.

В случае если в каком-либо испытании используется несколько штаммов данные должны быть представлены для каждого штамма по отдельности.

Представление данных для пандемическихи препандемических (зоонозных) вакциндля профилактики гриппа

С использованием методов реакции торможения гемагглютинации и (или) реакции одиночного радиального гемолиза, а также реакции нейтрализации вирусов необходимо представить доказательные сведения об иммуногенной активности вакцины. Необходимо провести оценку доли вакцинированных лиц с высокими титрами антител (значения в пределах доверительного интервала 95 %), а также фактор (кратность увеличения средних геометрических титров антител) и уровень сероконверсии. В целях описания корреляции необходимо сравнить данные, полученные с использованием различных методов: (реакции торможения гемагглютинации и (или) реакции одиночного радиального гемолиза, а также реакции нейтрализации вирусов)

Необходимо представить данные о кросс-реактивности и кросс-праймировании (как описано в пункте 99 настоящей главы).

9.3. Виды исследований иммуногенности

Исследования подбора дозы

Регистрационное досье гриппозной вакцины должно содержать данные, обосновывающие выбранную дозу, режим вакцинации и состав вакцины для различных целевых групп, которые планируется включить в показания к применению (распределение по возрасту и состоянию здоровья). Любое отклонение от требований должно быть обосновано и согласовано с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

Включение адъюванта в состав вакцины должно быть обосновано. В обосновании необходимо представить доказательные сведения о повышении иммунного ответа при добавлении адъюванта, потенциально приводящего к возможному снижению содержания антигена, и приемлемом профиле безопасности. Необходимо представить доказательные сведения, что выбранное для исследования соотношение количества антиген-адъювант является оптимальным для развития иммунного ответа на антиген с минимальным риском нежелательных явлений.

Необходимо провести исследование режимов дозирования вакцин с адъювантом, предназначенных для применения у детей и пожилых.

Если заявитель разрабатывает инактивированную сезонную вакцину без адъюванта для применения у детей, перед принятием решения о проведении исследований эффективности необходимо получить данные об иммунном ответе и провести соответствующие исследования по подбору дозы. Исследования по подбору дозы у детей необходимо проводить и оценивать подобно другим возрастным группам. Схемы первичной иммунизации необходимо изучить в группе детей в возрасте от 6 до 36 месяцев, которые наиболее вероятно не будут иметь специфического иммунитета к гриппу. В случае если вакцина оказывается слабоиммуногенной при применении у детей в возрасте ≤ 36 месяцев (то есть с выраженным низким иммунным ответом по сравнению с группой детей старшего возраста или подростками), проведение оценки профилактической эффективности вакцины в этой возрастной группе может быть нецелесообразным. Если результаты исследования по подбору дозы свидетельствует о том, что иммунный ответ на отдельную вакцинную конструкцию (состав) существенно отличается для одного из штаммов сезонной вакцины или на отдельный штамм, включенный в пандемическую или препандемическую (зоонозную) вакцину, такие результаты перед продолжением программы клинической разработки необходимо обсудить с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

Исследования иммунологической памяти и необходимости в ревакцинации

На момент регистрации сезонных вакцин для профилактики гриппа необходимо определить и обсудить с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов необходимость оценки иммунного ответа на введение бустерных доз. Данные целесообразно получить до подачи заявления на регистрацию или после регистрации в следующих случаях:

сезонные вакцины содержащие адъювант. Для того чтобы оценить необходимость ежегодной ревакцинации, в отношении сезонных вакцин, содержащих адъювант, необходимо изучить устойчивость иммунного ответа на первичную вакцинацию до 12 месяцев после окончания вакцинации (то есть до начала введения вакцины следующего сезона). Если есть популяции, для которых ежегодная вакцинация не рекомендована, устойчивость антител допускается изучать свыше 12 месяцев. В таких популяциях заявители должны предусмотреть подгруппы участников исследования для бустерного введения вакцины через один и два года после первичной иммунизации в целях изучения влияния потребности в повторной дозе и сроков ее введения;

инактивированные пандемические и препандемические (зоонозные) вакцины. В отношении пандемических и препандемических (зоонозных) вакцин данные об их иммуногенности необходимо накапливать в течение 6 месяцев после первичной вакцинации с целью оценки иммунологической памяти и (или) необходимости в ревакцинации (если применимо).

Исследования оценки иммунологических коррелятов защиты

При оценке эффективности инактивированных вакцин для профилактики гриппа исходят из предположения, что титр сывороточных антигемагглютинирующих антител в реакции торможения гемагглютинации, равный 1:40, обеспечивает 50 – 70 % защиту от инфекции у здоровых взрослых. При этом в настоящее время появляется все больше данных, свидетельствующих о том, что требуются более доказательные сведения о корреляции иммунологической активности и защитного эффекта, которые в свою очередь, могут варьировать в зависимости от типов вакцины, исследуемой популяции, возрастной группы (например, дети, пожилые лица).

В ходе программ разработки клинических исследований новых вакцин для профилактики гриппа заявители должны получить данные, которые могут выявить корреляты протективности от клинически манифестируемого гриппа. В ходе исследований эффективности необходимо изучить различные параметры иммунного ответа, а также провести анализ изучения корреляции между параметрами иммунного ответа и защитой от инфекции.

9.4. Исследования профилактической(протективной) эффективности

В настоящем разделе рассматривается дизайн клинических исследований профилактической (протективной) эффективности вакцин для профилактики гриппа в случаях, когда проведение таких исследований необходимо и целесообразно.

Дизайн исследования и выбор контроля

Клинические исследования должны быть проспективными рандомизированными контролируемыми двойными слепыми. Клинические исследования вакцин, как правило, проводятся с целью подтверждения эффективности вакцинации в сравнении с невакцинированной группой. Для обеспечения проведения двойного слепого метода клинического исследования при оценке эффективности вакцины целесообразно использовать вместо плацебо по возможности негриппозную контрольную вакцину (например, вакцины, предназначенные для профилактики других заболеваний). В качестве альтернативного варианта при достаточном обосновании заявители вправе провести исследование с активным контролем, в котором контрольной вакциной будет являться зарегистрированная вакцина против гриппа. В этом случае целью исследования будет являться подтверждение превосходства исследуемой вакцины над зарегистрированной (например, превосходство вакцины, содержащей адъювант, над вакциной, не содержащей адъювант). В зависимости от характеристик исследуемой вакцины и выбранного контроля, а также при достаточном обосновании необходимо предусмотреть анализ первичного конечного показателя исходя из подтверждения не меньшей эффективности. Выбор границ не меньшей эффективности подлежит соответствующему обоснованию заявителем.

При рандомизации необходимо учесть вероятность систематической ошибки. Количество субъектов исследования в каждом клиническом исследовании должно быть достаточным для обеспечения достижения целей исследований. Критерии невключения в исследование должны быть минимальными. В целях обеспечения адекватной оценки профилактической эффективности вакцины для профилактики гриппа при формировании основной и контрольной групп за единицу выборки необходимо принимать группу лиц, находящихся в одних и тех же условиях, например, по возрастным категориям (дети, взрослые, пожилые) или иным признакам (пациенты с сопутствующими заболеваниями), поскольку ожидается разный иммунный ответ на вакцину.

При определении единицы выборки при проведении исследований с участием детей необходимо учитывать возраст и иммунологический статус к вирусу гриппа, поскольку большинство субъектов исследования не будут иметь специфического иммунитета к гриппу.

При проведении исследований в группе пожилых необходимо предусмотреть, чтобы исследуемая популяция включала лица, как проживающие дома, но получающие социальные услуги на дому, так и проживающие в домах престарелых. В репрезентативную выборку необходимо включить лиц старше 75 лет.

Протоколы исследований защитной эффективности должны заранее определять оптимальные сроки и подгруппы взятия образцов с целью оценки показателей иммуногенности, а также оговаривать используемые методы. Если иммунологическому исследованию будут подвергаться сыворотки из подгруппы популяции, процесс отбора должен обеспечивать широкую репрезентативность образцов общей исследуемой популяции.

Первичные и вторичные конечные точки

Для установления эффективности исследуемой вакцины для профилактики гриппа в качестве основы первичной конечной точки должны быть приняты все случаи гриппоподобных заболеваний (ГПЗ), подтвержденные с использованием лабораторных методов, применяемых для диагностики гриппа (метод полимеразной цепной реакции или культуральный метод (выделение вирусов гриппа в клеточных культурах и куриных эмбрионах)). В случае если заявитель в качестве первичной переменной планирует использовать альтернативные или дополнительные показатели, то перед началом исследования эффективности их необходимо согласовать с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов. Например, при проведении исследований в группе пожилых лиц с лабораторно подтвержденным гриппом, в качестве первичной конечной точки может рассматриваться составная конечная точка, включающая случаи грипп-ассоциированной пневмонии, госпитализацию и смертность, вызванную гриппом.

При планировании исследований исходят из предположения о том, что в подавляющем большинстве зафиксированных случаев в исследовании будет преобладать один штамм или серотип (например, A/H1N1/ или A/H3N2/ или определенная линия вируса гриппа типа B), даже при проведении исследований на протяжении нескольких сезонов.

В зависимости от штамма, фактически преобладающего в зафиксированных случаях, заявители должны включить в обсуждение ожидаемую эффективность в отношении других типов вируса гриппа (например, при исследовании эффективности в отношении вируса гриппа серотипа A(H1N1), заявитель должен обсудить возможную экстраполяцию данных эффективности в отношении A(H3N2)). Кроме того, необходимо провести пострегистрационные исследования по оценке эпидемиологической эффективности в отношении специфичного штамма.

Критичной вторичной конечной точкой является оценка эффективности исследуемой вакцины против гриппа, вызванного штаммами, которые соотносятся со штаммами входящими в состав вакцины. Если исследования эффективности проводятся в сезон, когда рекомендуемые вакцинные штаммы не соответствуют преобладающим циркулирующим штаммам, это может повлиять на оценку эффективности вакцины, основанную на рекомендованной первичной конечной точке. В таком случае определение эффективности вакцины для профилактики гриппа для случаев, вызванных хорошо соответствующими штаммами, будет представлять значительную важность при оценке общей потенциальной пользы вакцины, при этом количество случаев, вызванных данными штаммами, во время исследования эффективности должно быть достаточным для проведения указанной оценки.

Другие вторичные конечные точки должны включать все случаи смертности, госпитализации, гриппоподобных симптомов, все случаи грипп-ассоциированной пневмонии и для детей – средний отит. Если оценивается снижение показателя вторичной очаговости в домашних или в школьных условиях, данные должны основываться на лабораторно подтвержденных случаях гриппа.

В протоколе исследований необходимо заранее описать анализ вторичных конечных точек, направленный на оценку частоты возникновения гриппа с учетом вакцинации препаратами для профилактики гриппа, поскольку для адекватной оценки эффективности вакцин для профилактики гриппа и получения достоверных данных о первичной иммунизации необходимо, прежде всего, учитывать исходный серологический статус субъектов исследования.

Заявитель вправе изучать конечные точки, касающиеся образа жизни (невыход на работу, использование ресурсов здравоохранения, затраты), однако эти данные не являются обоснованием достигнутой профилактической (протективной) эффективности при оценке эффективности вакцины.

Продолжительность исследования

В связи с неопределенностью продолжительности эпидемий и вероятности совпадения циркулирующих эпидемических и вакцинных штаммов в конкретном эпидсезоне сложно заранее определить необходимое количество сезонов, подлежащих включению в рамках одного клинического исследования. Для более надежной оценки эффективности вакцины клинические исследования требуют включения в исследования нескольких сезонов вакцинации.

Если исследование проведено в популяции, требующей ежегодной ревакцинации, то оценку результатов такого исследования необходимо включить в протокол исследования и план статистического анализа. Если исследование проводится в подгруппе популяции и странах, в которых вакцинация конкретно этой группы не рекомендуется, то данные, полученные во втором сезоне после вакцинации, потенциально информативны относительно протективности и кросс-протективности.

Поскольку в настоящее время получены лишь ограниченные данные эффективности вакцин содержащих адъювант и живых аттенуированных вакцин для профилактики гриппа в течение нескольких сезонов, вопрос о необходимости ревакцинации в последующих сезонах необходимо изучить в клинических исследованиях.

9.5. Исследования эпидемиологическойэффективности (эффективность в реальных условияхприменения) вакцин для профилактики гриппа

В план управления рисками необходимо включить пострегистрационные исследования эпидемиологической эффективности в отношении всех сезонных и пандемических вакцин для профилактики гриппа, включая вакцины, зарегистрированные в настоящее время, и новые вакцины.

Проведение надлежащей оценки эпидемиологической эффективности не всегда является возможным, поэтому держатель регистрационного удостоверения должен представить обоснование отсутствия или ограниченности данных в конкретный эпидемический сезон. При обосновании допускается представлять результаты мета-анализа оценки эпидемиологической эффективности отдельной вакцины на протяжении нескольких сезонов. Пострегистрационные исследования необходимо планировать и проводить на заранее определенных географических территориях в соответствии со специально разработанной программой.

В пунктах 131 – 136 настоящей главы приведены указания по дизайну исследований по оценке эпидемиологической эффективности сезонных вакцин для профилактики гриппа и пандемических вакцин в условиях пандемической ситуации.

Принципы планирования исследования

Для оценки эпидемиологической эффективности вакцин для профилактики гриппа необходимо использовать протоколы исследований, ранее использовавшиеся в условиях сезонных эпидемий и пандемии, например протокол исследования «случай – контроль» или проспективного когортного исследования, основанного на популяционных базах данных (регистрах), например, с валидацией клинических исходов с помощью полимезарной цепной реакции в подгруппе субъектов исследования. В случае, когда это невыполнимо, эпидемиологическая эффективность вакцины для профилактики гриппа оценивается по соотношению лабораторно подтвержденных случаев заболевания вакцинированных лиц к общей вакцинированной популяции. Для оценки эпидемиологической эффективности вакцины против гриппа необходимо провести исследования «случай – контроль» по сравнению с лабораторно подтвержденным гриппом.

Конечные точки и критерии признания случая

В каждом дизайне исследования необходимо предусмотреть лабораторно подтвержденные случаи гриппа. Выбор конечных точек исследования зависит от дизайна исследования.

Для дизайна «случай – контроль» или дизайна «случай – контроль с отрицательным результатом» первичной конечной точкой исследований должен быть случай лабораторно подтвержденного гриппа. На основании условий исследования (общая популяция или стационары) вторичные конечные точки могут учитывать способность вакцин предотвращать пневмонию и госпитализацию (обусловленные гриппом или связанные с ним респираторные или кардиологические нарушения), либо смерть.

Для когортного дизайна возможными конечными точками являются:

респираторные инфекции, требующие оказания медицинской помощи;

гриппоподобные заболевания, требующие оказания медицинской помощи;

все случаи смертности;

смертность от респираторных инфекций;

госпитализация в связи с пневмонией и гриппом;

все случаи госпитализации респираторных заболеваний;

лабораторно подтвержденные случаи респираторных инфекций и (или) пневмонии и гриппа с госпитализацией;

поступление пациента в отделение интенсивной терапии.

В дополнение к оценке эпидемиологической эффективности вакцины держателям регистрационного удостоверения необходимо в рамках тех же исследований эпидемиологической эффективности осуществлять анализ образцов на наличие антигена или выделение вируса из образцов.

Необходимо фиксировать возраст субъектов исследования, вакцинальный статус (включая анамнез вакцинации), тяжесть заболевания у вакцинированных лиц, географический район и неделю начала гриппоподобных заболеваний в течение сезона или пандемии. Эти данные важны при рассмотрении данных об эпидемиологической эффективности вакцины (например, соотнесение эффективности вакцины с циркулирующими штаммами, эффективности вакцины в отношении дрейфовых вариантов вируса гриппа в течение эпидемического сезона или пандемии).

Критерием признания случая гриппа является лабораторное подтверждение гриппа методом ПЦР с обратной транскрипцией(ОТ-ПЦР) или с использованием культуры клеток в аттестованных лабораториях.

Целевая популяция

Эпидемиологическую эффективность вакцины для профилактики гриппа необходимо исследовать в популяции, которая указана в показаниях к применению такой вакцины. Данные допускается получать лишь в той стране, в которой вакцина зарегистрирована.

Необходимо сопоставлять данные возрастных когорт:

детей, подростков;

лиц младше 65 лет;

лиц в возрасте 65 лет и старше;

лиц старше 75 лет.

Необходимо оценить эпидемиологическую эффективность вакцин для профилактики гриппа в группах риска (пациенты с хроническими заболеваниями, беременные). В целях контроля различных искажающих факторов и получения достоверной информации при анализе данных необходимо предусмотреть многофакторный подход.

С целью предотвращения заболевания гриппом новорожденных заявителям необходимо получить данные об эпидемиологической эффективности вакцин для профилактики гриппа при вакцинации матерей.

Выбор субъектов исследования

Для снижения потенциальной систематической ошибки отбора субъектов исследования необходимо использовать стандартизированные подходы к отбору лиц в исследованиях с активным сбором данных (например, исследования «случай – контроль с отрицательным результатом»). Необходимо фиксировать следующие сведения:

дату вакцинации и торговое наименование введенной вакцины;

данные о начале симптомов гриппоподобных заболеваний;

данные о сборе образцов;

лабораторный метод подтверждения;

подлинность штаммов гриппа, выделенных в качестве этиологических;

данные о потенциально важных искажающих факторах, таких как предшествующая вакцинация против гриппа (в течение нескольких лет, если применимо), наличие и тяжесть хронических заболеваний, анамнез курения, обращение за медицинской помощью, любая госпитализация в связи с хроническими заболеваниями за предыдущие 12 месяцев;

клинические сведения (например, госпитализация в связи с тяжелым течением гриппа).

В исследованиях с использованием популяционных баз данных (например, в когортных исследованиях) необходимо предусмотреть план по выявлению возможных систематических ошибок (например, включение справочных сведений, содержащихся в существующих базах данных).

Представление результатов

Результаты исследований эпидемиологической эффективности вакцин для профилактики гриппа необходимо представлять ежегодно по мере их получения. Анализ эпидемиологической эффективности необходимо представлять по типам и подтипам (серотипам) вируса гриппа. Результаты анализа эпидемиологической эффективности необходимо представить для каждой исследуемой популяции. В связи с тем, что оценка эпидемиологической эффективности вакцин для профилактики гриппа может проводиться в различные периоды времени, допускается представление промежуточных результатов, которые получают в режиме реального времени до получения заключительных результатов по окончанию сезонной эпидемии.

Интерпретация результатов

Результаты пострегистрационных исследований зарегистрированных вакцин для профилактики гриппа позволяют получить важные сведения об эффективности каждой вакцины, особенно, для новых вакцин. Несмотря на ограничения при проведении эпидемиологического надзора по оценке вакцинопрофилактики, требуется ежегодное представление данных об эпидемиологической эффективности. Отчет об эпидемиологической эффективности вакцин для профилактики гриппа включает в себя результаты исследований в течение нескольких сезонов.

При выявлении отклонений от ожидаемых результатов (например, снижение эффективности в связи со снижением качества отдельной вакцины или подозрением на снижение качества) требуется применение регуляторных мер.

9.6. Исследования по оценке безопасности

Для изучения вероятности возникновения дополнительных серьезных нежелательных явлений длительность наблюдения за вакцинируемыми должна составлять не менее 6 месяцев после введения вакцины (введения последней дозы).

В исследования безопасности вакцин для профилактики гриппа любого типа должны быть включены, как правило, не менее 3000 человек (общая численность популяций).

Заявителям необходимо согласовывать предлагаемую численность субъектов, включаемых в исследование безопасности с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов в ходе разработки программы клинического исследования, поскольку в зависимости от типа и конструкции (состава) вакцины требования могут отличаться.

Требования к размеру исследуемой популяции и частоте нежелательных реакций при исследовании безопасности новых вакцин для профилактики гриппа до подачи заявления о регистрации представлены в таблице.

Таблица

Необходимый размер исследуемой популяциипри исследовании безопасности новых вакцин для профилактики гриппа в зависимости от их частоты и целевой группы

№

Целевая группа (показания к применению)

Частота нежелательных реакций

Размер базы данных по безопасности для обнаружения нежелательных реакций указанной частоты

1.

Взрослые в возрасте 18 – 65 лет или

дети в возрастеот 6 месяцев до 17 лет или

пожилые лицав возрасте старше65 лет

≤ 1 на 1000 вакцинированных (редкие нежелательные реакции)

достаточно базы данных из примерно 3000 субъектов исследования в единственной или в одной из указанных возрастных групп;

допускается, чтобы объем данных в других возрастных группах был меньше

2.

Дополнительные возрастные группы к любой из указанных в строке 1 (например, младенцы, дети, подростки, пожилые)

≤ 1 на 100 вакцинированных (нечастые нежелательные реакции)

достаточно базы данных из примерно 300 субъектов исследования от каждой дополнительной возрастной группы

3.

Дополнительные группы риска к любой из указанных в строках 1 и 2 (например, лица с иммунодефицитом, лица с хроническими заболеваниями)

≤ 1 на 100 вакцинированных (нечастые нежелательные реакции)

достаточно базы данных из примерно 300 субъектов исследования от каждой дополнительной возрастной группы риска

В каждой изучаемой возрастной группе необходимо предусмотреть соответствующую стратификацию. Например, при проведении исследований в группе детей, общая выборка целевой популяции должна составлять, по крайней мере, 3000 субъектов исследования, при этом каждая детская возрастная группа (дети грудного возраста и младенцы, дети в возрасте 2 – 8, 9 – 11 лет, подростки 12 – 14 лет и 15 – 17 лет) должна включать не менее 300 субъектов исследования, при условии отсутствия непредвиденных нежелательных реакций в детских возрастных группах. Если в исследования включают как взрослых, так и детей, общий размер популяции должен составлять 3000 взрослых плюс 300 субъектов исследования из каждой детской возрастной группы: младенцы, дети и подростки (итого приблизительно 900 детей) при условии отсутствия непредвиденных серьезных нежелательных реакций в детских возрастных группах.

Поскольку накоплен объем данных по безопасности по применению инактивированных безадъювантных сезонных вакцин (расщепленных и субъединичных) и моновалентных адъювантных пандемических вакцин во время беременности, достаточный для обоснования применения данных вакцин на всех этапах беременности, достоверных данных по безопасности при применении вакцин для профилактики гриппа у взрослых достаточно для обоснования использования вакцин данных типов при беременности. Для вакцин для профилактики гриппа других типов или при использовании других типов адъювантов объем данных по безопасности, который необходимо представить для обоснования их применения при беременности, требуется согласовать в рамках предрегистрационных консультаций с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

В случае если выявлены серьезные нежелательные реакции и есть опасение, что они могут быть вызваны вакциной, то потребуются дополнительные данные о безопасности.

Данные о безопасности, полученные при применении адъюванта отдельно от антигенов, могут служить источником дополнительных данных. Любое отклонение от требований должно быть обосновано и согласовано с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов до подачи заявления.

В случае применения ЖГВ в дополнение к требованиям, указанным в пунктах 148 – 153 настоящей главы, в рамках разработки программы клинических исследований необходимо представить данные по интенсивности и длительности выделения от привитых пациентов вакцинного вируса. В протоколе исследований должны быть предусмотрены меры исключения потенциального риска передачи вируса от привитых лиц к контактным лицам, особенно иммунокомпрометированным. При расширении исследований безопасности необходимо изучить воздействие ЖГВ на людей с хроническими заболеваниями, прежде всего дыхательной и сердечно-сосудистой систем.

10. Пострегистрационные требованияпо фармаконадзору

При подаче заявления о регистрации для каждой вакцины для профилактики гриппа необходимо представить план управления рисками в соответствии с требованиями, указанными в Правилах практики фармаконадзора.

В плане управления рисками вакцин для профилактики гриппа должны быть учтены выявленные и потенциальные риски возникновения редких и очень редких нежелательных реакций не изученных в клинических исследованиях, а также риск развития нежелательных реакций в группе иммунокомпрометированных лиц и пациентов с сопутствующими заболеваниями.

План управления рисками и проведение пострегистрационных исследований должны быть согласованы с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов.

10.1. Все типы вакцин для профилактики гриппа

План управления рисками должен предусматривать что в случае если требуется описать применение вакцины у популяций, не изученных в ходе клинических исследований (например, у иммунокомпрометированных лиц), то на пострегистрационном этапе необходимо получить соответствующие данные по иммуногенности и (или) эпидемиологической эффективности, а также необходимости применения бустерной дозы для данной популяции.

Пожилые люди и лица с хроническими заболеваниями должны составлять основную часть планируемой программы пострегистрационного мониторинга.

10.2. Сезонные вакцины для профилактики гриппа

В отношении сезонных вакцин для профилактики гриппа план управления рисками должен предусматривать расширенный сбор данных по безопасности вакцины. Необходимо оценить безопасность и реактогенность новых штаммов (в связи с обновлением штаммового состава сезонных вакцин) с точки зрения местных и системных нежелательных реакций при применении в различных возрастных группах, особенно у маленьких детей (при наличии показаний к применению). Такие данные необходимо получить с самого начала ежегодной кампании массовой вакцинации. Результаты необходимо своевременно представлять уполномоченным органам государств-членов.

10.3. Препандемические вакцины для профилактики гриппа

В отношении препандемических вакцин для профилактики гриппа план управления рисками должен предусматривать следующее:

а) проведение обсервационных исследований в случае применения препандемических вакцин для профилактики гриппа при проведении государственных программ иммунизации целевой популяции в конкретном государстве-члене;

б) при инфицировании вакцинированных лиц циркулирующими штаммами гриппа, обладающих пандемическим потенциалом (например, лица, работающие на птицефабриках, где зафиксированы случаи вспышек гриппа птиц или зафиксированы случаи инфекции человека вследствие контактов с больными животными), необходимо осуществлять сбор сведений о всех случаях возникновения заболевания у вакцинированных. Сбор дополнительных данных следует осуществлять в популяциях, которые не изучались в рамках клинических исследований;

в) мониторинг эпидемиологической эффективности вакцины, применяемой в условиях пандемии. Такие данные будут информативными для планирования стратегий будущих препандемических вакцинаций. Если данные становятся доступными достаточно рано до признания пандемии и они свидетельствуют о протективных свойствах вакцины, это позволит использовать все доступные пандемические вакцины для вакцинации преимущественно ранее невакцинированных популяций.

10.4. Пандемические вакцины для профилактики гриппа

В случае применения пандемических вакцин план управления рисками должен предусматривать следующее:

а) оценку эпидемиологической эффективности и безопасности применения пандемических вакцин у беременных, поскольку в условиях пандемии именно они будут являться первой целевой популяцией при проведении кампании по вакцинации. Вакцинация беременных женщин может дополнительно защитить новорожденных от инфекции. Эффективность и безопасность должны контролироваться, и такие исследования необходимо планировать во время процедуры регистрации;

б) сбор данных об иммуногенности, эпидемиологической эффективности и безопасности применения вакцин для профилактики гриппа во время пандемии, должен осуществляться совместными усилиями фармацевтических компаний и органов системы здравоохранения. Своевременный обмен и анализ полученных данных позволят быстро реагировать на необходимость внесения изменений в штаммовый состав пандемической вакцины, режим и программу проведения вакцинации в ходе пандемии;

в) в дополнение к оценке частоты местных и системных нежелательных реакций в ранний поствакцинальный период, необходимо предусмотреть потенциальные риски возникновения специфических долгосрочных, а также редких и очень редких нежелательных реакций, (например, риск нарколепсии или синдрома Гийена-Барре). В отношении пандемических вакцин необходимо получить масштабные данные о безопасности в рамках полевого применения;

г) перед подачей заявления на изменение пандемического штамма держатели регистрационного удостоверения должны обсудить и согласовать с уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов планы по расширенному мониторингу безопасности, подлежащему проведению в пандемический период.

11. Общая характеристика лекарственного препарата и маркировка вакцин для профилактики гриппа

Не имеется типовой общей характеристики лекарственного препарата и типовой маркировки для отдельных типов вакцин для профилактики гриппа. Общую характеристику лекарственного препарата и маркировку лекарственного препарата заявителю необходимо формировать, основываясь на собственных данных, полученных для каждого типа вакцины.

1. Общие положения

В 1980 г. Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ) была принята резолюция о достижении полной ликвидации натуральной оспы, путем применения вакцины на основе вируса из семейства ортопоксвирусов, отличного от вируса натуральной оспы, но обеспечивающего кросс-протективность против вируса натуральной оспы. В настоящее время осповакцина на случай чрезвычайной ситуации, а также для вакцинации лиц группы риска, производится по технологии существовавшей в период глобальной ликвидации оспы (то есть до 1980 г.) и не в полной мере соответствует объему требований, установленных к производству биологических препаратов и надзору за их безопасностью.

Вакцины против оспы делятся на три группы:

а) вакцины первого поколения – большинство выпускаемых до 1980 года осповакцин, произведенных с использованием живых животных (телят, овец, буйволов и кроликов). Кролики, в частности, использовались для наработки посевного материала, а основными видами животных для производства вакцины были телята и овцы. Сохранение производства с использованием живых животных имеет свои преимущества, поскольку ранее было доказано, что полученная вакцина обладает достаточной эффективностью, а все процессы производства хорошо задокументированы и могут быть развернуты в короткие сроки. Однако такие вакцины не всегда позволяют обеспечить выполнение требований к процессу производства и качеству полученного продукта в части микробиологического загрязнения;

б) вакцины второго поколения, использующие системы культур тканей (почек кролика и крупного рогатого скота) или куриные эмбрионы. Вакцины на основе вируса осповакцины, приготовленные на куриных эмбрионах имеют опыт применения в странах Южной Америки, Израиле. Опыт промышленного производства осповакцин на культуре клеток ограничен (в Японии была произведена вакцина на куриных эмбриональных фибробластах (chick embryo fibroblasts, CEFs), которая имела благоприятный профиль безопасности, но данные по ее эффективности были недостаточно задокументированы). Они содержат реплицирующийся вирус и вводятся в организм методом скарификации кожи;

в) вакцины третьего поколения, содержащие вирусы, произведенные при помощи генной инженерии и (или) технологий переноса генов.

В настоящее время основным видом вакцин против оспы являются вакцины второго поколения. С учетом того, что вирус осповакцины довольно широко используется в качестве вектора для экспрессии антигенов (особенно в исследованиях, связанных с вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ)), имеется значительный опыт производства небольших его серий, подходящих для клинического применения с использованием современных методик, главным образом, CEFs, диплоидных клеток человека MRC-5 и линии клеток почки африканской зеленой мартышки, Vero. Однако в то время как иммунный ответ на переносимые гены тщательно изучался, ответ на сам вирус осповакцины документировался гораздо менее детально, а опыт изучения эффективности собственно вакцин против оспы, выращенных на культуре клеток, отсутствует или ограничен. Уровень качества в отношении микробиологической чистоты, который можно достигнуть для данных вакцин, гораздо выше такого уровня для вакцин, произведенных с использованием живых животных. Однако реальный уровень безопасности и эффективности вакцины будет зависеть не только от отсутствия в ней примесей, но также и от качества вирусного посевного материала. Несмотря на высокую микробиологическую чистоту, следует отметить, что вакцины, выращенные на тканевой культуре, могут быть связаны с такими же серьезными нежелательными реакциями, что были выявлены у вакцин животного происхождения, наиболее широко использовавшихся в программе ликвидации оспы. Следует отметить, что производство на культуре тканей предполагает адаптацию вирусного штамма к используемому клеточному субстрату и эффект от подобной адаптации в отношении иммуногенности и безопасности вакцины подлежит изучению, а свойства произведенной вакцины устанавливаются на соответствующей животной модели.

2. Сфера применения

В свете потенциальной возможности использования вируса натуральной оспы как фактора биотерроризма, а также возникновения мутаций в семействе ортопоксвирусов у вируса оспы обезьян настоящая глава содержит указания по разработке вакцин второго поколения против инфекций, вызываемых вирусами оспы, потенциально патогенными для человека, связанные с производством, программами доклинической и клинической разработки противооспенных вакцин, произведенных с использованием вируса осповакцины, наработанного на культуре тканей или куриных эмбрионах. Системы культур тканей включают в себя первичные культуры клеток, диплоидные или перевиваемые клеточные линии.

Настоящая глава содержит указания по проведению оценки уполномоченными органами (экспертными организациями) государств-членов качества, безопасности и иммуногенности вакцин против оспы второго поколения, произведенных с применением методик, описанных в пункте 4 настоящей главы. В настоящей главе приводятся указания по представлению заявителем данных, необходимых для получения регистрационного удостоверения на вакцину против оспы.

Положения настоящей главы не применяются в отношении вакцин против оспы, произведенных на основе вируса осповакцины, выращенного с использованием живых животных (вакцины против оспы первого поколения). В отношении требований к вакцинам против оспы первого поколения производители вправе применять указания Всемирной организации здравоохранения в отношении организации производства и контроля качества вакцин против оспы. Вакцины против оспы третьего поколения также исключены из сферы применения настоящей главы, однако приведенные в ней положения допускается применять при производстве и оценке таких вакцин.

В отношении производства, контроля качества и клинических исследований вакцин против оспы второго поколения применяются требования настоящих Правил, Фармакопеи Союза (а при отсутствии в ней – фармакопей государств-членов) в отношении:

использования клеточных субстратов;

контроля посторонних биологических агентов;

использования стад кур в производстве вакцин;

использования бычьей сыворотки.

3. Выбор вакцинного штамма

3.1. История получения штамма

Для целей выполнения требований настоящей главы при производстве вакцин допускается применение следующих штаммов вируса осповакцины (генетическая связь данных штаммов друг с другом остается неизученной), которые использовались в период ликвидации оспы:

а) штамм Lister, разработанный в институте Листера (синоним «штамм Elstree» или «Lister/Elstree», поскольку указанный институт располагался в городе Элстри в Великобритании). Главный посевной материал был получен Национальным институтом здравоохранения Нидерландов в сотрудничестве с ВОЗ и хранится там до настоящего времени. Он был приготовлен путем двух пассажей на лимфе телят из оригинального материала, полученного в 1961 г. на лимфе овец. Главный посевной материал был отправлен в центры в Париже, Токио, Атланте и Москве. Материал также был предоставлен производителям вакцины по всему миру, при этом многие из них независимо получили посевной материал из своей производственной культуры. Использовался 23 из 59 производителей вакцины во время эрадикационной кампании;

б) штамм NYCBOH (New York City Board of Health (Совет по вопросам здравоохранения города Нью-Йорк)), который использовался в Северной и Южной Америке, а также в Западной Африке. Семь производителей вакцины использовали этот штамм. Штамм EM-63, использовавшийся в СССР, являлся производным от штамма NYCBOH и широко применялся во время кампании по искоренению оспы в Индии;

в) другие штаммы вируса осповакцины:

штамм Paris, использовался 7 производителями вакцины на четырех континентах;

штаммы Copenhagen, Bern и Temple of Heaven (последний – использовался в Китае и, возможно, был более иммуногенным по сравнению с другими штаммами).

Не допускается без соответствующего обоснования использование при производстве вакцин нереплицирующихся штаммов, таких как:

штамм модифицированного вируса Ankara (MVA), представляющий собой экспериментальный штамм, созданный путем многократных пассажей на куриных эмбриональных фибробластах (CEFs), в результате чего является высокоаттенуированным вирусным штаммом, способным к ограниченному размножению в культуре человеческих клеток. Штамм применялся в Германии для иммунизации нескольких сотен тысяч людей в качестве первичной вакцинации для смягчения нежелательных явлений. Эпидемиологическая эффективность данного штамма неизвестна. Аттенуированные штаммы допускается включать в изучение и разработку с целью возможного применения у иммунокомпрометированных лиц;

прочие нереплицирующиеся штаммы, например, NYVAC.

3.2. Доступность штамма

Производителям необходимо оценить доступность штамма для организации производства на регулярной основе.

Главный посевной материал штамма Lister хранится в Национальном институте здравоохранения Нидерландов. Запрос на получение должен первоначально должен быть направлен в ВОЗ.

Запросы на получение штамма NYCBOH выполняются в Центр по контролю и профилактике заболеваний (Centers for Disease Control and Prevention, CDC) в США.

Информация о доступности и возможности получения других штаммов должна уточняться производителем самостоятельно.

3.3. Факторы, влияющие на выбор штамма

Профили безопасности различных штаммов могут варьироваться, а имеющиеся сравнительные данные крайне ограничены. Более задокументирована информация по вакциноассоциированным побочным реакциям в отношении штаммов Lister и NYCBOH в сравнении с другими штаммами, использовавшимися во время осуществления программы по ликвидации оспы.

В связи с тем, что производство клеточной культуры и клональная селекция могут привести к изменению характеристик вируса, представляется затруднительным дать четкие указания по выбору штамма. Тем не менее при этом учитываются следующие факторы:

профиль безопасности и биологические характеристики родительского штамма;

предполагаемая эффективность (основанная на успешной ликвидации оспы) вакцины, изготовленной на основе родительского штамма, оцениваемая по доле успешно вакцинированных и применению в полевых условиях;

история родительского штамма;

ростовые характеристики выбранного штамма в клеточном субстрате;

имеющийся у производителя опыт изготовления штамма для противооспенных вакцин первого поколения.

3.4. Стандартные образцы

Международный стандартный образец (произведенный с использованием пашины овцы), изготовленный на основе штамма Lister, доступен в Национальном институте биологических стандартов и контроля Великобритании (National Institute for Biological Standards and Control, NIBSC). Данный международный стандартный образец предоставляется в небольшом количестве и предназначен для оценки специфической активности стандартных образцов предприятия. Допускается использование для этих же целей образцов NIBSC, эквивалентных международному стандартному образцу для противооспенной сыворотки.

Допускается использовать подходящие национальные стандартные образцы, откалиброванные по международному стандартному образцу и произведенные другими контрольными лабораториями государства-члена с целью калибровки стандартных образцов производителя. Принимая во внимание сокращение запасов международных стандартных образцов, в перспективе допускается их замена новыми наработанными стандартными образцами при их надлежащей аттестации. Потенциальный производитель вакцины против оспы обязан предоставить информацию о направленных им запросах относительно о доступности новых стандартных образцов.

4. Требования к качеству вакцин против оспы

4.1. Посевные культуры вакцинного штамма

Приготовление культуры вакцинного штамма

Должна использоваться система посевной культуры вакцинного штамма, включающая в себя главную посевную культуру и рабочую посевную культуру. Разработка и создание данных культур, их условия хранения и срок годности должны быть подробно описаны. Культуру готовят пассажем выбранного вакцинного штамма в клеточном субстрате, который будет использоваться в производстве вакцины, или in ovo, если планируется данный метод производства вакцины. Общепризнано, что продолжительный многократный пассаж вирусного штамма в культуре тканей или in ovo может снизить его иммуногенные свойства, в связи с чем количество пассажей от родительского штамма вируса к главной и рабочим посевным культурам должно быть ограничено и должным образом обосновано. При производстве конечной серии вакцины, количество пассажей вакцинного вируса из рабочей посевной культуры не должно превышать количества пассажей при производстве вакцины для клинических исследований, если иное не будет соответствующим образом обосновано и одобрено уполномоченным органом (экспертной организацией) государства-члена. Вакцины должны производиться из рабочей посевной культуры с минимальным количеством промежуточных пассажей.

Приготовление главной посевной культуры из штамма родительского вируса может включать клонирование при помощи методики бляшкообразования или другие формы клональной селекции. Клонирование при помощи методики бляшкообразования может быть полезным в удалении возможных побочных вирусов, находящихся в вакцине наряду с родительским штаммом, а также делает популяцию вакцинного штамма более однородной. При этом необходимо учитывать, что в результате может быть отобрана атипичная субпопуляция, в связи с этим необходимо будет описать характеристики главной посевной культуры в различных системах, в том числе в условиях in vivo.

Установление характеристикглавной посевной культуры

Необходимо сделать максимально полное описание главной посевной культуры. В данное описание необходимо включить полную задокументированную историю родительского штамма, полное описание характеристик в сравнении со штаммом родительского вируса, хотя для данной цели доступно только ограниченное количество родительских штаммов. Установление характеристик должно включать следующие пункты (отсутствие любого пункта должно быть обосновано):

антигенный анализ с использованием специфичной антисыворотки и (или) моноклональных антител;

биологические исследования: определение титров инфекционности, культивирование на хориоаллантоисной мембране с образованием местных вирусных поражений, выход вирусного материала in vitro и ростовые характеристики in vivo на подходящей животной модели;

генетические анализы, такие как: картирование с использованием разных рестрикционных ферментов и Саузерн-блоттинга, ПЦР-анализ и ограниченные исследования методом секвенирования;

стабильность генетических и фенотипических характеристик после пассажа в субстрат, используемый для производства;

исследование нейровирулентности (в соответствии с разделом 5 настоящей главы);

исследования иммуногенности (в соответствии с разделом 5 настоящей главы).

Количество исследований зависит от предшествующей истории оригинального штамма, истории клеток, использовавшихся в его приготовлении, применения клональной селекции и от природы всех реагентов, использовавшихся в приготовлении посевной культуры.

Необходимо определить вирусные титры главной и рабочей посевной культуры, а также проводить мониторинг вирусного титра рабочей культуры во время хранения с целью обеспечения однородности вакцинной продукции.

Исследование на наличие посторонних агентов

При проведении исследований на наличие посторонних биологических агентов необходимо принимать во внимание историю пассажей родительского вирусного штамма и клеточных субстратов, использовавшихся в производстве клеточных культур. Исторически, в XIX веке, для размножения вируса использовались овцы, козы, телята, буйволы, кролики и люди. Однако вряд ли можно установить полную историю пассажей вирусного штамма, поэтому сохраняется возможность того, что любой штамм мог пересеваться в пределах более чем одного вида. Например, посевной материал ВОЗ штамма Lister, был получен на лимфе телят из материала, первоначально полученного на лимфе овцы.

Основным методом исследования штамма живой вирусной вакцины на наличие посторонних вирусов являются испытания in vitro и in vivo с предварительной нейтрализацией вакцинного вируса. Испытания вирусного сбора в клеточной культуре, полученного с использованием куриных эмбрионов, культуры первично трипсинизированных клеток, необходимо проводить на трех типах клеток:

гомологичной, приготовленной из другой партии производственного субстрата (например, фибробласты куриных или перепелиных эмбрионов);

клетках человека или обезьяны (например, диплоидные клеточные культуры человека Л-68 или MRC-5, или клетки Vero);

наиболее чувствительных клетках для выявления вирусов – возможных контаминантов используемого субстрата (например, почки эмбриона кур).

Если вирус выращен на клетках обезьяны или человека в системе банков клеток, то нейтрализованный вирусный сбор испытывают на отдельной культуре этих клеток. Вирус осповакцины крайне трудно нейтрализовать до той степени, которая необходима в ходе проведения данных испытаний. Необходимо учитывать, что вирусный материал может содержать фенотипически различные внутриклеточные и внеклеточные формы, при этом первые нейтрализуются легче, чем последние. Необходимо отметить, что если исследуемый вакцинный вирус перед нейтрализацией был разведен до более низкого титра с целью достижения полной нейтрализации, это может негативно повлиять на чувствительность при обнаружении посторонних вирусов. Если требуемые испытания нельзя провести из-за невозможности полностью нейтрализовать вирус, посевной материал можно развести до концентрации, соответствующей разведению, используемому для инокулята в производстве вакцины до испытания на посторонние вирусы.

Основное исследование должно проводиться в соответствии с требованиями Фармакопеи Союза. При отсутствии соответствующей статьи в Фармакопее Союза исследование может проводиться согласно требованиям фармакопеи референтного государства. Также могут потребоваться дополнительные исследования, которые могут включать в себя методы амплификации нуклеиновых кислот для определенных вирусов, а также испытания на ретровирусы с использованием обратной транскриптазы. В случае если полная нейтрализация вакцинного вируса не может быть достигнута, допускается использовать альтернативные методы обнаружения посторонних специфических загрязнений. При исследовании на наличие определенных вирусов, необходимо также обращать внимание на восприимчивость к ним произведенного клеточного субстрата (в соответствии с подразделами 4.2 – 4.4 настоящей главы).

Если в разработке или производстве главной и рабочей посевной культур использовались материалы крупного рогатого скота или иных видов животных, источников губчатой энцефалопатии, необходимо учитывать требования актов органов Союза по минимизации риска передачи агентов губчатой энцефалопатии животных посредством лекарственных препаратов для медицинского применения.

Испытания на стерильность, содержание микобактерий и микоплазм должны проводиться в соответствии с требованиями Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – с требованиями фармакопей государств-членов. При приготовлении главного посевного материала необходимо применять процедуры, которые способствуют удалению из материала посторонних агентов. Поскольку удаление или инактивация данных агентов на любом этапе производственного процесса живой вакцины против оспы практически невозможно, наличие посторонних агентов в посевных культурах не допускается.

4.2. Банк клеток

Система банков клеток должна состоять из главного банка клеток и рабочего банка клеток. Получение и установление характеристик банков клеток необходимо осуществлять в соответствии с настоящими Правилами и требованиями Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – с требованиями фармакопей государств-членов.

Необходимо исследовать потенциальную вероятность инфицирования клеточного субстрата патогенными агентами, которые могут присутствовать в вирусном посевном материале. Так как данная вероятность имеет большую зависимость от истории родительского вакцинного штамма, производителю необходимо выполнить условия, указанные в подразделе 4.1 настоящей главы.

Клеточная линия, используемая для приготовления живых вакцин, не должна обладать туморогенными свойствами на любом уровне удвоения популяции, используемой для производства вакцины.

4.3. Первичные клеточные культуры

Так как первичные клеточные культуры не используются для создания банка клеток, невозможно провести их всестороннюю проверку и установление характеристик, как это делается в отношении диплоидных или перевиваемых клеточных линий.

Требования, указанные в подразделе 4.2 настоящей главы, относятся к клеточным культурам, используемым для создания банка клеток и дополняют требования по использованию первичных культур приложения к главе 1 настоящих Правил.

Первостепенную важность при использовании первичных клеточных культур имеет недопущение их загрязнения посторонними агентами. Животные, используемые в качестве источника ткани для приготовления первичного клеточного субстрата, должны быть выращены в закрытых, беспатогенных (specified pathogen free – SPF) колониях или стадах и использоваться исключительно с целью получения первичных клеточных культур. Данные колонии или стада должны строго и регулярно контролироваться на предмет наличия и поддержания беспатогенного (SPF) статуса. Стада кур, используемых в качестве источника первичных клеточных культур, должны соответствовать требованиям Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – требованиям фармакопей государств-членов.

Необходимо исследовать потенциальную вероятность инфицирования клеточного субстрата патогенными агентами, которые могут присутствовать в вирусном посевном материале. Так как данная вероятность зависит от истории родительского вакцинного штамма, производителю также учитывать положения подраздела 4.1 настоящей главы, а также данные, полученные ранее при организации промышленного производства и использования коревой и паротитной живых аттенуированных вакцин, произведенных на первичных культурах куриных эмбриональных фибробластов, приведенные в указаниях ВОЗ для живых моновалентных и комбинированных вакцин против кори, паротита и краснухи (в частности данных указаний, касающихся получения клеточных культур из эмбрионов птиц).

4.4. Куриные эмбрионы

Ключевой особенностью использования куриных эмбрионов является недопущение их загрязнения посторонними агентами. В связи с этим используемые яйца должны быть получены от закрытых, беспатогенных (SPF) здоровых стад, которые содержатся исключительно для целей получения посевного материала или производства вакцины. Данные стада, в соответствии с требованиями Фармакопеи Союза, должны строго и регулярно контролироваться на предмет наличия и поддержания беспатогенного (SPF) статуса. Для производства живой аттенуированной вакцины против оспы должны использоваться яйца кур только из стад, прошедших указанный контроль.

Необходимо исследовать потенциальную вероятность инфицирования куриных эмбрионов патогенными агентами, которые могут присутствовать в вирусном посевном материале. Так как данная вероятность зависит от истории родительского вакцинного штамма, производителю также необходимо обратиться к подразделу 4.1 настоящей главы.

4.5. Производство вакцины

В целом, производство вакцин против оспы второго поколения аналогично производству других живых вирусных вакцин, включая технологические стадии, в связи с чем основные требования к производству и контролю за данными вакцинами против оспы будут практически идентичны требованиям к производству других живых вакцин.

Заявителю необходимо привести полное описание процесса производства вакцины. Клетки, полученные из банков клеток, первичные клеточные культуры млекопитающих или птиц и (или) эмбрионы птиц должны соответствовать требованиям настоящих Правил и Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – фармакопей государств-членов. Все материалы, используемые в процессе производства, должны быть должным образом описаны и быть соответствующего качества. Одобренные сыворотки животного происхождения используются только при условии того, что уровень остаточных загрязнений в них был снижен до допустимых пределов. При использовании бычьей сыворотки необходимо руководствоваться требованиями Фармакопеи Союза по минимизации риска передачи губчатой энцефалопатии животных. При использовании любых материалов животного происхождения требуется соблюдение требований актов органов Союза в сфере ветеринарного законодательства, обращения лекарственных средств для медицинского применения и соответствующих статей Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – соответствующих статей фармакопей государств-членов. Пенициллин, другие бета-лактамные антибиотики и стрептомицин не должны использоваться в процессе производства вакцины, и (или) в качестве добавки к конечному продукту.

Культивирование вакцинного вируса

Клеточную суспензию в концентрации, используемой для посева клеточных культур-продуцентов вакцины (не менее 5 % или не менее 500 мл, если этот объем будет меньшим) не подвергают заражению вирусом и исследуют в качестве контрольных клеток производственной клеточной культуры. Если вакцина производится с использованием банка клеток, контрольные клетки должны выдерживать испытания на обнаружение цитопатических изменений и феномена гемадсорбции. Контрольные клетки изучают под микроскопом в течение периода инкубации производственной клеточной культуры до времени сбора вируса с культуры, но не менее 14 дней после посева, на отсутствие любой цитопатической реакции вирусного происхождения. Результаты испытания считают достоверными, если не менее 80 % контрольных клеток остаются жизнеспособными. Не менее 25 % контрольных клеток, не ранее, чем на 14-й день после посева, испытывают на наличие феномена гемадсорбции путем добавления эритроцитов морских свинок.

Если вакцина производится с использованием первичных клеточных культур контрольные клетки, отобранные в день инокуляции производственной серии, подвергают испытанию, описанному в подразделах 4.1 и 4.3 настоящей главы.

Если при исследовании контрольных клеток в одном из испытаний обнаружены цитопатические изменения или феномен гемадсорбции, то вирусный сбор, полученный в производственной культуре, не должен быть использован для приготовления вакцины.

Однократные сборы вируса

Необходимо описать выбранный способ сбора вакцинного продукта. Вирус осповакцины представлен как во внутриклеточной, так и во внеклеточной формах. Протокол сбора вируса должен учитывать то, что внутриклеточную форму вируса необходимо будет высвободить из производственной клеточной культуры или куриного эмбриона. Обычно однократные сборы вируса объединяются в общий пул, из которого готовится конечный балк. Однако, в зависимости от размера единицы продукции, одна или несколько из указанных стадий могут не потребоваться.

Необходимо провести испытания на подлинность в отношении собранного вируса. Необходимо определить вирусный титр после фильтрации или стадии очистки, либо с помощью теста на хориоаллантоисной мембране (результат выражают в единицах сформировавшихся оспин на мл) либо при помощи валидированной методики титрования вируса в культуре клеток, при этом результаты выражают в CCID50 (50 % инфекционная доза для клеточной культуры) или в единицах бляшкообразования (каждая бляшка принимается за одну инфекционную единицу). Для валидации методики титрования необходимо включать в исследование референтный препарат. Необходимо установить минимально допустимое значение титра для использования однократного сбора вируса в приготовлении вирусного пула или конечного балка.

Исследования на посторонние агенты необходимо проводить на каждом однократном сборе согласно требованиям Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – требованиям фармакопей государств-членов, при этом дизайн исследований должен учитывать трудность нейтрализации вируса осповакцины и способность вируса осповакцины вызывать в культуре цитопатогенное и гемадсорбирующее действие. Испытуемый материал после предварительной нейтрализации вируса иммунной сывороткой или удаления вируса исследуют в культуре клеток на наличие цитопатических изменений и феномена гемадсорбции, как описано в подразделах 4.1 настоящей главы и в настоящем подразделе. В случае если полная нейтрализация вируса не достигается, испытания в культуре клеток заменяются специфическими испытаниями, например, с помощью метода амплификации нуклеиновых кислот и иммунохимическими методами. При этом тест-системы, способные выявить возможные посторонние агенты, должны быть нечувствительны к вирусу осповакцины.

Способ производства (а именно: использование клеточной культуры из банка клеток, первичной клеточной культуры или куриных эмбрионов) должен учитывать природу каждого вируса, подвергаемого исследованию. Все тест-системы должны быть надлежащим образом валидированы, а предел обнаружения для потенциальных патогенных агентов необходимо документально зафиксировать и обосновать.

Необходимо оценить безопасность контрольных клеток относительно потенциальной контаминации посторонними агентами при помощи микроскопического исследования для обнаружения цитопатических эффектов, а также при помощи других испытаний в соответствии с Фармакопеей Союза, а при отсутствии в ней – в соответствии с фармакопеями государств-членов. Для производства вакцины против оспы с использованием куриных эмбрионов необходимо оценивать контрольные куриные эмбрионы из каждой серии, используемой для производства, на наличие гемагглютинирующих агентов и вирусов лейкоза птиц.

Также необходимо проводить испытания однократных сборов вируса на стерильность и содержание микоплазм согласно требованиям Фармакопеи Союза, а при отсутствии в ней – требованиям фармакопей государств-членов.

Вирусные пулы

Необходимо разработать и описать стратегию объединения однократных сборов вируса в вирусный пул. При этом необходимо использовать только однократные сборы вируса, успешно прошедшие испытания, описанные в пунктах 37 – 42 настоящей главы. Вирусный пул должен являться частью стадии очистки и должен быть подвергнут концентрированию с целью получения необходимого вирусного титра. Все технологические операции с вирусным пулом должны быть детально описаны. Необходимо проводить испытания вирусных пулов на стерильность согласно Фармакопее Союза.

Конечный балк

Конечный балк допускается приготавливать из одного или нескольких вирусных пулов, а также получать из однократного сбора вируса. При этом необходимо использовать только однократные сборы вируса и вирусные пулы, успешно прошедшие испытания, описанные в пунктах 37 – 43 настоящей главы.

Состав

При изготовлении конечного балка необходимо учитывать следующие аспекты. Необходимо подтвердить, что все вещества, добавляемые к продукту во время приготовления конечного балка (растворители, стабилизаторы или любые другие наполнители) не ухудшают эффективность и безопасность вакцины в используемых концентрациях. Для долгосрочного хранения необходимо использовать лиофилизацию. При восстановлении лиофилизированной вакцины глицерин в разбавителе служит для стабилизации вакцины и способствует ее лучшему прикреплению к поверхности бифуркационной иглы или ланцета для вакцинации. При этом использование бифуркационной иглы для введения вакцины является предпочтительным. В восстановительную среду возможно добавление красителя, если это не ухудшает безопасность, активность и стабильность после вскрытия и в ходе применения восстановленной вакцины.

Добавление антибиотиков в качестве консервантов не допускается. Для многодозовых составов следует оценить необходимость применения эффективных антимикробных консервантов, с учетом возможной микробной контаминации во время использования и рекомендованного максимального срока годности (срока хранения) после вскрытия упаковки и восстановления вакцины. В случае применения антимикробного консерванта, он не должен ухудшать показатели качества и безопасности вакцины.

Испытания конечного балка

Титр конечного балка должен учитывать его возможное снижение во время процессов наполнения, лиофилизации и на протяжении всего срока годности (срока хранения) вакцины. Качественный и количественный анализ конечного балка вакцины должен включать в себя испытания по оценке содержания общего белка, испытания вспомогательных веществ, контроль остаточных сывороточных белков животного происхождения (например, бычьего сывороточного альбумина). Полученные результаты должны соответствовать результатам, указанным в спецификациях.

В зависимости от типа используемого субстрата (пересеваемых клеточных линий) следует разработать соответствующие и должным образом валидированные испытания на остаточные ДНК и белки клетки-хозяина. Каждая порция конечного балка должна быть подвергнута испытанию на стерильность согласно Фармакопее Союза.

Конечный вирусный балк необходимо исследовать на нейровирулентность на подходящей животной модели (например, интрацеребральная инокуляция на мышах) с целью подтверждения соответствия препарата его биологическому фенотипу. Исследование нейровирулентности также может быть проведено на этапе вирусного пула. В исследование можно включить референтный препарат, которым может быть предыдущая порция конечного балка или вирусного пула. По мере накопления данных об использовании препарата, необходимость проведения данного исследования может быть пересмотрена.

До фасовки в первичную упаковку (наполнение контейнеров) конечный балк необходимо хранить при условиях, которые продемонстрировали способность сохранять его вирусную активность.

Наполнение продукции

Наполнение и маркировка контейнеров должны осуществляться согласно требованиям к производству биологических лекарственных препаратов в соответствии с Правилами производственной практики.